Suplemento 2011 - Facultad de Medicina - Universidad Nacional ...

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Canale L. Hernán y Col. Rev. Fac. Med. UNNE XXXI: Supl., 7 - 10, 2011 Introducción Las plantas medicinales cumplen un rol importante en la atención primaria de la salud en las comunidades de la norpatagonia, y en el marco del proyecto de investigación “Plantas autóctonas de uso medicinal de la Norpatagonia: evaluación de su bioactividad” se propone conocer la bioactividad de las especies autóctonas, particularmente aquellas vinculadas a usos como hipoglucemiantes e hipolipemiantes. A partir del relevamiento de las plantas se identificó que el neneo (Mulinum spinosum) es una planta que se utiliza popularmente para “bajar el azúcar y las grasas de la sangre”. Esta especie es muy utilizada en la denominada línea sur de la provincia de Río Negro donde los pobladores que hacen uso frecuente de ella relataron en las entrevistas que el producto de la decocción de la raíz del neneo es ingerida previamente a cada comida, y que se utiliza popularmente como tratamiento crónico para el control de la diabetes y de dislipemias. La evaluación de la actividad de los extractos acuosos de M. spinosum sobre la glucemia en modelos animales hiperglucémicos en ayunas, permitió establecer que la decocción administrada en forma aguda y subaguda actuaría como normoglucemiante, y a su vez permitiría disminuir los efectos deletéreos inducidos por Alloxan sobre el peso (1). Los efectos del neneo sobre el control de la glucemia postingesta (evaluada a través de la PTOG) modificaría la respuesta a la sobrecarga de glucosa, mostrando una disminución de la glucemia medida a los sesenta minutos con respecto a los animales no tratados (1). Como la evaluación del efecto de neneo sobre la homeostasis de la glucosa mostró resultados alentadores, los estudios sobre el metabolismo lipídico se hacen necesarios para completar la investigación. Por ello, se planteó el objetivo de generar un modelo de ratón hiperlipidémico, a partir de la modificación en su dieta; con el fin de estandarizar un modelo experimental que garantice la evaluación de plantas con posibles acciones hipolipémicas. En la literatura científica se pueden hallar estudios donde se induce la alteración del perfil lipídico en diversos modelos biológicos (2). En ratas, la hipercolesterolemia pudo ser inducida a través de la dieta utilizando combinaciones de colesterol y grasa saturada o en combinación con proteínas, como la caseína (3,4). También hay trabajos donde se utiliza tritón, agente tensioactivo que impide la captación del colesterol circulante por los tejidos periféricos y en consecuencia provoca una elevación de las concentraciones de lipoproteínas en suero cuando se administra a los animales para generar modelos experimentales de hiperlipemia aguda (5). En el perfil lipídico influyen cantidad y tipo de grasas consumidas. La grasa total de la dieta está formada por ácidos grasos saturados y ácidos grasos insaturados, poliinsaturados y monoinsaturados. Los ácidos grasos saturados son principalmente hipercolesterolemiantes, porque generan una disminución del aclaramiento de LDL-c, inhibiendo la síntesis y la actividad de sus receptores, y aumento de la síntesis de apo-B. Las grasas saturadas de la dieta no deben sobrepasar el 10% del total de calorías ingeridas para no generar modificaciones en el perfil lipídico (6). Como la dieta es el principal factor de riesgo ambiental, y por tanto modificable, del perfil lipídico; y la población que hace uso del neneo posee una dieta rica en grasas animales, se optó por generar un modelo de animal hiperlipidémico a partir de la modificación de las grasas de su dieta. Materiales y métodos Animales: Se utilizaron ratones macho BalbC, de entre 25 y 30 gr de peso, entre 35 a 40 días de edad, del bioterio del Laboratorio de Fisiología. Los animales se alimentaron normalmente con una dieta comercial y agua ad libitum hasta el inicio del tratamiento. Los animales fueron alojados en jaulas de acrílico con un ciclo de 12 horas luz-oscuridad (8.00 AM – 8.00 PM) y temperatura de 21 ± 1ºC. Los animales fueron manipulados acorde al International Council for Laboratory Animal Science (ICLAS). Dietas: Los animales se dividieron en dos grupos al azar, Grupo I control con dieta comercial (alimento balanceado extrusado Cooperación, rata-ratón, Buenos Aires) y Grupo II con dieta grasa constituida por 70% alimento balanceado y 30% grasa bovina (Primer jugo bovino Pilotti, La Pampa) con consumo ad libitum, por 4 semanas. -Composición de la dieta comercial: proteínas 23%, fibra 6%, minerales 10%, hidratos de carbono 40%, Exc. 5%, humedad 15%, aceite de origen vegetal y material de origen animal: harina de pescado. -Composición de la grasa bovina comercial: 90% grasas saturadas. Durante las 4 semanas se monitoreó el consumo de cada dieta, pesando los pellets y la grasa remanente. Evaluación de parámetros anatómicos: -Control de peso del animal: se monitoreó el peso de los animales al inicio y al finalizar el tratamiento (antes del periodo de ayuno). -Control de estructura y peso hepático: al finalizar el tratamiento, se sacrificaron los animales, se pesaron, y posteriormente se extrajo el hígado para su control anatómico y pesado. Evaluación de parámetros bioquímicos: Para realizar las determinaciones bioquímicas se mantuvieron los animales en 12 horas de ayuno previas a la extracción. Al finalizar el ensayo se sacrificaron los animales y se tomaron las muestras de sangre por punción cardíaca. 8
Canale L. Hernán y Col. Rev. Fac. Med. UNNE XXXI: Supl., 7 - 10, 2011 El estudio del perfil lipídico incluye la medición en el plasma del colesterol total, el colesterol unido a las lipoproteínas de baja densidad, el colesterol unido a las lipoproteínas de alta densidad, además de los triglicéridos (TG). Se utilizó la fórmula introducida por Friedewald (LDL-colesterol = colesterol total – (triglicéridos/5 + HDL colesterol) para estimar el valor de las LDL. Las muestras se centrifugaron (10 min, 1500 rpm) y se obtuvo el suero para la cuantificación de colesterol total, triglicéridos y HDL-colesterol por métodos enzimáticos usando Reactivos Wiener (Enzymatic Cholestat AA, Color Triacylglycerols GPO/PAP AA y Monofase Cholesterol HDL AA) en Autoanalizador A25 de BioSystems. Se dosó la glucemia con sensor Accu-Chek Sensor Active (Roche Diagnostics, Alemania) y se obtuvo el hematócrito por la técnica de microhematócrito. Figura 1: Efecto de una dieta rica en grasa bovina sobre parámetros anatómicos en ratones Figura 1: Los resultados se expresan como media±SD (n=8) Figura 2: Efecto de una dieta rica en grasa bovina sobre parámetros bioquímicos en ratones Estadística Para el análisis de los resultados se utilizó el programa estadístico Statistica, evaluando la normalidad y varianza de los datos y realizando la estadística comparativa Test t de Student (p
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