DIPLOMOVÁ PRÁCE - Vysoká škola chemicko-technologická v Praze

Obsah
1. Úvod.................................................................................................................................. 1
2. Současný stav řešené problematiky .................................................................................. 2
2.1 Retroviry ................................................................................................................... 2
2.1.1 Struktura virionu ........................................................................................................4
2.1.2 Hlavní strukturní proteiny ........................................................................................5
2.1.3 Životní cyklus retrovirů ............................................................................................6
2.2 HIV a M-PMV .......................................................................................................... 8
2.2.1 Virus HIV ...................................................................................................................8
2.2.2 Virus M-PMV ............................................................................................................9
2.3 Matrixový protein ................................................................................................... 11
2.3.1 Významné modifikace matrixového proteinu......................................................12
2.3.2 Funkce MA proteinu ...............................................................................................18
2.3.3 Struktura matrixového proteinu .............................................................................19
2.4 Významné mutace v MA proteinu.......................................................................... 22
2.4.1 Významné mutace v HIV-1 MA............................................................................23
2.4.2 Významné mutace v M-PMV MA ........................................................................25
3. Experimentální část......................................................................................................... 27
3.1 Materiál ................................................................................................................... 27
3.1.1 Chemikálie................................................................................................................27
3.1.2 Roztoky .....................................................................................................................28
3.1.3 Buněčný materiál .....................................................................................................32
3.1.4 Použité plasmidové expresní vektory....................................................................32
3.1.5 Přístroje .....................................................................................................................32
3.2 Metody .................................................................................................................... 33
3.2.1 Příprava kompetentních buněk ..............................................................................33
3.2.2 Transformace kompetentních buněk .....................................................................34
3.2.3 Produkce rekombinantního matrixového proteinu M-PMV v E. coli ..............34
3.2.4 Desintegrace buněk E. coli obsahujících rekombinantní protein ......................35
3.2.5 Metaloafintiní chromatografie ...............................................................................35
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