Abril 2011, Arg<strong>en</strong>tina 39de rebaje, fuerte o periódica se efectúa <strong>en</strong> ciclos de 4 a6 años, con los objetivos de reducir la altura de la planta,aum<strong>en</strong>tar la relación masa foliar/madera, reemplazarlas ramas muertas o dañadas y recuperar los r<strong>en</strong>dimi<strong>en</strong>tos<strong>en</strong> un nuevo ciclo. La poda de r<strong>en</strong>ovación, rejuv<strong>en</strong>ecimi<strong>en</strong>too recepado se efectúa cada 30 a 35 años conun corte a nivel del suelo del eje o los ejes principales dela planta, con el objetivo r<strong>en</strong>ovar completam<strong>en</strong>te elesqueleto de la planta.La manufactura se efectúa como té negro sobre el98,5% de la materia prima, exportándose del total de téseco un 95% con destino principal a EEUU, Chile,Inglaterra, Holanda y Alemania (International TeaCommittee, 2005). El proceso compr<strong>en</strong>de las típicas etapasde marchitado, <strong>en</strong>rulado, ferm<strong>en</strong>tado, secado, clasificación,mezcla y <strong>en</strong>vasado; exist<strong>en</strong> diversidades <strong>en</strong>trelas difer<strong>en</strong>tes plantas <strong>en</strong> los sistemas de <strong>en</strong>rulado, secadoy clasificación (Werkhov<strong>en</strong>, 1974; EEA Cerro Azul,1996; Jose, 2001; Prat Kricun, 2003).Es importante conocer la composición química delbrote y de las hojas, por las reacciones que estos compuestossufr<strong>en</strong> durante sus difer<strong>en</strong>tes procesos demanufactura, así como la importante contribución de losmismos a las características de astring<strong>en</strong>cia, color, brillo,pung<strong>en</strong>cia, flavor y propiedades estimulantes propias delproducto (Herath et al., 1993). Además de los compon<strong>en</strong>tesnormales de cualquier tejido vegetal como hidratosde carbono, lípidos, proteínas y minerales, <strong>en</strong>contramosotros constituy<strong>en</strong>tes como los polif<strong>en</strong>oles <strong>en</strong> cantidadestales que distingu<strong>en</strong> al té de otros vegetales (EEA CerroAzul, 1996; Laur<strong>en</strong>s et al., 1998; Tocklai Exp. St., 2003b).Estos están pres<strong>en</strong>tes <strong>en</strong> los jugos celulares y sufr<strong>en</strong> unaserie de cambios químicos cuando la hoja es desintegradadurante la manufactura. Son derivados del ácido gálicoy las catequinas. Los métodos de análisis químicostradicionales y la cromatografía, permit<strong>en</strong> separar másde una doc<strong>en</strong>a de difer<strong>en</strong>tes compuestos, con configuraciónquímica basada <strong>en</strong> la catequina y el ácido gálico. Notodos ellos están pres<strong>en</strong>tes <strong>en</strong> forma natural <strong>en</strong> la hojade té; algunas de ellas son formas isoméricas producidasdurante el proceso de extracción y análisis. Las 6 que sereconoc<strong>en</strong> <strong>en</strong> los trabajos a campo son: epigalocatequina-3-galato(EGCG), epigalocatequina (EGC), epicacatequina-3-galato(ECG), epicatequina (EC), galocatequina(GC) y catequina(C). Si bi<strong>en</strong> el rol de los polif<strong>en</strong>oles <strong>en</strong>g<strong>en</strong>eral y las catequinas <strong>en</strong> particular está asociado a laresist<strong>en</strong>cia a plagas y <strong>en</strong>fermedades, su función <strong>en</strong> té esestudiada con det<strong>en</strong>imi<strong>en</strong>to <strong>en</strong> función a las tolerancias yresist<strong>en</strong>cias <strong>en</strong> nuevos cultivares (Punyasiri et al., 2000).Con respecto a sus propiedades biológicas cuando seconsum<strong>en</strong>, se absorb<strong>en</strong> intestinalm<strong>en</strong>te (Dashwood,1999, 2002) y rápidam<strong>en</strong>te se metabolizan, para formarcompuestos metilados, glucuronizados y sulfatados. Seha <strong>en</strong>contrado que puede ocurrir el metabolismo por bacterias,que normalm<strong>en</strong>te colonizan el colon. EGCG repres<strong>en</strong>tadel 10-50% de las catequinas totales y parece serla más poderosa de las catequinas; su actividad antioxidantees aproximadam<strong>en</strong>te 25-100 veces más pot<strong>en</strong>teque las vitaminas C y E. Los más importantes efectosbiomédicos son la protección contra el cáncer y las <strong>en</strong>fermedadescardiovasculares (Flores et al., 2003). En lostrabajos experim<strong>en</strong>tales, la actividad prev<strong>en</strong>tiva del té, sedocum<strong>en</strong>tó bi<strong>en</strong> para los tumores <strong>en</strong> difer<strong>en</strong>tes órganos.En los humanos, se informó que el té es protector contratumores <strong>en</strong> pulmón, tracto gastrointestinal e hígado, ademásprevi<strong>en</strong>e la salud bucal (Udagama et al., 2000).La investigación ha mostrado que el té es antiaterogénicoreduci<strong>en</strong>do colesterol y triglicéridos (Vinson et al.,1998); reduce coágulos sanguíneos, refuerza la funcióninmune, la pérdida de peso y es anticanceríg<strong>en</strong>o (Yang etal., 1997). Teóricam<strong>en</strong>te, la alta actividad antioxidante delté, lo hace b<strong>en</strong>eficioso protegi<strong>en</strong>do el cuerpo del daño oxidativo,debido a los radicales libres. Las <strong>en</strong>fermedadesque están asociadas con el daño por radicales libres incluy<strong>en</strong>cáncer, <strong>en</strong>fermedades cardíacas, función inmunesuprimida y el <strong>en</strong>vejecimi<strong>en</strong>to acelerado.Una gran cantidad de evid<strong>en</strong>cia ci<strong>en</strong>tífica indica losb<strong>en</strong>eficios de beber té, por su amplia gama de propiedadesmedicinales (Tocklai Exp. St., 2003a). Así, el té se pres<strong>en</strong>tapor su esfera de acción, como el quimioprev<strong>en</strong>tivomás práctico, incluido <strong>en</strong> una dieta saludable para protecciónde los consumidores <strong>en</strong> g<strong>en</strong>eral, reduci<strong>en</strong>do el riesgode difer<strong>en</strong>tes tipos de cáncer. La Asociación deInvestigación de té (TRA), <strong>en</strong> Tocklai (India) <strong>en</strong> la colaboracióncon el Instituto Indio de Biología Química (IICB), <strong>en</strong>Kolkata ha llevado a cabo los estudios sobre difer<strong>en</strong>tesaspectos de salud y consumo de té negro. En estos estudios,se examinó la influ<strong>en</strong>cia de té <strong>en</strong> su conjunto y susdistintos compon<strong>en</strong>tes aislados. Los resultados indicaronlo sigui<strong>en</strong>te:*La administración regular de dosis bajas de extractode té negro (0.002-0.2%) reduce significativam<strong>en</strong>te losniveles de colesterol total <strong>en</strong> ratas.*Las proporciones normales de extracto de té negroreduc<strong>en</strong> significativam<strong>en</strong>te los niveles del triglicéridos.*El nivel de HDL (lípidos de alta d<strong>en</strong>sidad) aum<strong>en</strong>tó, sinembargo, su nivel no resulto significativo.*Los niveles de VHDL (lípidos de muy alta d<strong>en</strong>sidad) yLDL (lípidos de baja d<strong>en</strong>sidad) mostraron una disminuciónligera pero el efecto no era significativo.Así, los resultados indicaron que la administración perman<strong>en</strong>tede té negro <strong>en</strong> animales, es capaz de reducirel colesterol total y triglicéridos a niveles saludables. Losflavonoides del té previ<strong>en</strong><strong>en</strong> oxidación del colesterolLDL.La determinación del cont<strong>en</strong>ido de antioxidantes <strong>en</strong> té,constituy<strong>en</strong> parámetros con efectos sobre la salud de losconsumidores (Ch<strong>en</strong>g, 1999). Determinarlos <strong>en</strong> los cultivaresdifundidos, su relación con los tés comunes originados<strong>en</strong> plantaciones de semilla y su variación a lo largodel período de zafra tealera (Jose, 2001), permitirá a laactividad negociar su producto, con un conocimi<strong>en</strong>to másprofundo de sus cualidades.PRAT KRICUN, S.D. 1
40 ARTÍCULOS<strong>RIA</strong> / Vol. 37 N.À1La adopción rutinaria de la determinación de catequinas<strong>en</strong> té negro, permitirá mejorar las v<strong>en</strong>tajas competitivasdel té arg<strong>en</strong>tino como un producto de calidad no sólovalorado por su bu<strong>en</strong> color y adaptabilidad a las mezclas.El objetivo del pres<strong>en</strong>te proyecto es determinar el cont<strong>en</strong>idode catequinas de los cultivares comerciales másdifundidos <strong>en</strong> la región tealera arg<strong>en</strong>tina, elaboradoscomo té negro.MATE<strong>RIA</strong>LESSe emplearon los cultivares CH 14 <strong>INTA</strong>, CH 112<strong>INTA</strong>, CH 318 <strong>INTA</strong>, CH 410 <strong>INTA</strong>, CH 732 <strong>INTA</strong> y lapoblación Larraburu como control. El lote fue implantadoa campo <strong>en</strong> julio de 1966, con un distanciami<strong>en</strong>to de1,60 x 0,80m y una d<strong>en</strong>sidad de 7.810 pl ha -1 , se ubica<strong>en</strong> la EEA Cerro Azul del <strong>INTA</strong>, Cerro Azul, Misiones,27°39' S, 55°26' W y una altitud de 283 m. Su mant<strong>en</strong>imi<strong>en</strong>tose efectuó de acuerdo a las prácticas de manejorecom<strong>en</strong>dadas por la EEA Cerro Azul-<strong>INTA</strong>. Las recoleccionesse efectuaron con una cosechadora mecánicade tiro manual, estableci<strong>en</strong>do 3 épocas de recolecciónd<strong>en</strong>tro de la zafra. Inicio del 27/11 al 7/12, pl<strong>en</strong>azafra del 22/01 al 27/01 y fin de zafra del 3/04 al 10/04.Las recolecciones se efectuaron <strong>en</strong>tre las 11 a 14horas, por triplicado para cada uno de los 5 cultivares yla población control.PROCESAMIENTOLas muestras de brotes verdes sin clasificar, fueron <strong>en</strong>promedio de 500 g; su micromanufactura se inició con unmarchitado <strong>en</strong> forma natural hasta un porc<strong>en</strong>taje de marchitadodel 60 a 65% ( ec.1 ), por un período de 18 a 21horas posteriores a la recolección. ( ec.1 ) Porc<strong>en</strong>taje demarchitado = (Peso marchitado / Peso fresco) x 100.El brote marchito fue <strong>en</strong>rulado <strong>en</strong> 2 pasos sucesivos,por una micro <strong>en</strong>ruladora Rotorvane (6,5 cm diámetro x 22cm de longitud). Luego el material <strong>en</strong>rulado fue desagregado<strong>en</strong> forma manual para facilitar su "ferm<strong>en</strong>tación", pormedio de un tamiz de alambre y distribuido <strong>en</strong> una capade uniforme de 2 cm ± 0,5 sobre una bandeja de aluminio.Las bandejas con el material <strong>en</strong>rulado fueron llevadas asala de ferm<strong>en</strong>tado, con una humedad relativa de 95 a100% y una temperatura de 23,8 °C ± 1,6; por un tiempode 60 a 90 minutos hasta alcanzar un color marrón habanoy su aroma característico. Luego el material ferm<strong>en</strong>tadofue distribuido <strong>en</strong> una fina capa, sobre una bandeja demadera con fondo de alambre tejido de fina malla. Cadabandeja fue introducida a un microsecadero eléctrico conaire forzado, a una temperatura de 100 °C ± 2 por un tiempode 25 a 30 minutos, hasta alcanzar una humedad del 3al 5% y su típico color negro. Cada muestra fue <strong>en</strong>vasada<strong>en</strong> bolsas multipliegos de aluminio, etiquetada y conservada<strong>en</strong> cámara frigorífica a -18 °C ± 2.Determinación de catequinasSe procesa cada muestra <strong>en</strong> un molinillo de café, sedetermina su cont<strong>en</strong>ido de humedad (ISO 1572) y posteriorm<strong>en</strong>tese pesan 1,5 g de la misma. Se adicionan 90mL de agua destilada estéril apiróg<strong>en</strong>a <strong>en</strong> ebullición alos 1,5 g de la muestra, <strong>en</strong> un vaso de precipitado de250 mL. Se lleva a un baño de agua a 80 o C por 10 minutos,con agitación periódica. La solución se <strong>en</strong>fría <strong>en</strong>refrigerador a 4 o C, por 5 minutos. Se filtra luego consucción a través de un embudo buchner de 12 cm, conun papel de filtro Whatman N. o 1 y se recoge el filtrado<strong>en</strong> un kitasato de 250 mL (Obando et al., 1996). Setransfiere mediante una pipeta automática, 1 mL del filtradoobt<strong>en</strong>ido a un tubo de <strong>en</strong>sayo de 10 mL, se diluyecon agua apiróg<strong>en</strong>a 1:2. Estas soluciones se empleanpara la determinación por HPLC.Se utilizó un cromatógrafo líquido Shimadzu LC 6A,equipado con un integrador CR3 A y un detector UVShimadzu SPD-6A (195-350nm), calibrado a 280 nm(Shimadzu Corp., 2001). Se utilizó una columna fasereversa Lichrospher RP18 5 Micrón, de 250 mm x 4 mm.La fase móvil A fue 95,45: 4,5: 0,05 (H 2 O apiróg<strong>en</strong>a /acetonitrilo (HPLC)/ ácido fosfórico), la fase móvil B fue49,45: 50: 0,05 (H 2 O apiróg<strong>en</strong>a / acetonitrilo (HPLC)/ácido fosfórico) (Goto, T. et al, 1996). La fase móvil detrabajo fue A/B (70:30). Flujo 1.0 mL/minuto. Temperatura25 o C ± 1. Inyección 5 µL. Intervalo <strong>en</strong>tre muestras 5minutos. Para la curva de calibración se utilizaron lasmisma fase móvil A/B (70:30), con los estándares provistospor Sigma Chemical Co. (St.Louis, Mo) de epigalocatequina-3-galato(EGCG):(E-4143), epigalocatequina(EGC):(E-3768), epicatequina (EC): E-4018), catequina(C): C-0567), catequina galato (CG): C-0692) y cafeína:(C-8960). Estos fueron disueltos <strong>en</strong> una solución 95/5,agua/metanol (HPLC), <strong>en</strong> las sigui<strong>en</strong>tes conc<strong>en</strong>tracionesEGCG 300 mg L -1 , EGC 850 mg L -1 , EC 250 mg L -1 , C200 mg L -1 , CG 250 mg L -1 y cafeína 200 mg L -1 .Para la id<strong>en</strong>tificación de las catequinas se tomaron lostiempos de ret<strong>en</strong>ción de cada compuesto; para la determinaciónde su cantidad se tomó como refer<strong>en</strong>cia el áreade los picos obt<strong>en</strong>ida con la inyección de 5 µL de la solucióncon la mezcla de estándares. Se repetía la inyecciónde la mezcla de estándares a intervalos regulares, luegode la inyección de seis muestras.Los cont<strong>en</strong>idos de catequinas y cafeína se analizaronpor variancia (P
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