Revista Newslab Edição 182

CITOMETRIA DE FLUXO
O QUE É FRET?
(FLUORESCENCE RESONANCE ENERGY TRANSFER)
Por Fernanda Vitelli Lins, Rafaele Loureiro de Azevedo, Bruna Garcia Nogueira e Helena Varela de Araújo
A técnica de FRET (Fluorescence
Resonance
Energy Transfer) é baseada
na transferência
de energia de um fluorocromo
doador que
foi excitado para um
outro próximo que será
denominado receptor
(Figura 1). Ela é utilizada
para estudar a interação
entre proteínas e
este processo só ocorre
quando a fluorescência
da molécula doadora
se sobrepõem com a
molécula receptora,
geralmente a uma proximidade
menor que
10nm (Figura 2).
A Citometria de Fluxo é
um método não invasivo,
sensível e quantitativo
que permite a análise de
Figura 1. Diagrama descrevendo o efeito FRET. Após a excitação do fluoróforo doador, parte
da energia é perdida enquanto o restante é transferido para um elétron próximo do fluoróforo
receptor. Fonte: Hochreiter, Bernhard, et. al. (2019).
uma grande quantidade
de células e amostras em
um período de tempo
razoável. Através da citometria
é possível mensurar
individualmente em
cada célula a emissão de
milhares de células por
segundo utilizando lasers
e filtros já otimizados
para diferentes faixas de
comprimento de ondas.
Quando o laser excita a
molécula doadora, mas
não a receptora, isso
causa uma redução relativa
na intensidade de
fluorescência da molécula
doadora, e ao mesmo
tempo um aumento
158 Revista NewsLab Edição 182 | Março 2024