dissertacia-myrzabaeva.pdf
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
титірлеп, Homer et al (1961) әдістері бойынша атомды- абсорбциялық<br />
спектроскопиямен өлшеді.<br />
Аскорбат (АСК) және дегироаскорбаттың (ДАСК) мөлшерін анықтау<br />
Аскорбатты анықтау Law және тағы басқалардың (1983 ж) әдістері<br />
бойынша анықталды [170]. Өсімдік ұлпасындағы аскорбатты өлшеу үшін ең<br />
алдымен өсімдік ұлпасын 5%-мета-фосфор қышқылымен 1:5 қатынасында<br />
гомогенделеді. Кейін алынған экстракт 14,000 айналымда 20 минутқа 4°С-та<br />
центрифугаланып, супернатант жиналды. Аскорбатты анықтаушы қоспаны<br />
талдау үшін құрамы келесідегідей ерітінді дайындалды: 0,1 мл өсімдік<br />
экстрактісі, 150мМ натрий фосфатты буферлік ерітіндідегі 0,1 мл 5 мМ ЭДТА<br />
және 0,2 мл бидистилденген су қосылды. Ал жалпы аскорбат (АСК+ДАСК)<br />
құрамын анықтау үшін келесі реакциялық қоспа дайындалды: 0,1 мл өсімдік<br />
экстрактісі, 150мМ натрий фосфатты буферлік ерітіндідегі 0,1 мл 5 мМ<br />
ЭДТА, 10мМ ДTT 0,05мл және 0,15 мл бидистелденген су қосылды. Алынған<br />
қоспаны 15 мин бөлме температурасында инкубациялап, ДTT-дың артық<br />
мөлшері 0,05 мл 0,5% N-этилмалемидтің көмегімен тотықтырылады. Екі<br />
жағдайда да (АСК және ДАСК) реакциялық қоспаның түсі 0,2 мл 10%<br />
трихлорсірке қышқылы (ТСҚ), 0,2мл 44% ортофосфор қышқылы, 0,2 мл 4%<br />
дипиридил және 0,1 мл 3% темір хлоридімен өңделді. Үлгілерді мұқият<br />
араластырғаннан кейін 1 сағатқа 37°С - қа инкубирлеп, кейін оптикалық<br />
тығыздығы 525нм-да спектрофотометрде өлшедік.<br />
Өсімдік ұлпасындағы тұтас полифенол синтезін анықтау<br />
Тұтас полифенол мөлшері Singleton және Rossi (1965ж) сипаттаған,<br />
модифицирленген әдістері бойынша анықталды [171]. Қысқаша, 0,2г мұздаған<br />
жапырақ үлгісін ұнтағыш пен келсапта қатынасы 1:3,5 болатын 100мМ<br />
натрий-фосфатты буфермен бөліп аламыз. Алынған экстрактіні 14,000<br />
айналымда 20 минутқа 4°С-та центрифугалаймыз (Z 233 MK-2, HERMLE)<br />
және супернатантты жинаймыз. Қоспаны талдау үшін арнайы реактивтер:<br />
0,1мл өсімдік үлгісінің аликвотына 0,125 мл 2Н фолин-циклатор, 0,5мл 35%<br />
Nа 2 СО 3 және 4,28 мл бидистелденген су қосып, шайқалмалы су моншасында<br />
(COMFORT HETO MASTER SHAKE) 150 айналымда, 30°С-та 60 мин<br />
көлемінде инкубациялаймыз. Алынған түстің оптикалық тығыздығы 730 нм<br />
спектрофотометрде (JASCO, модель V-530) белгілі (ГҚ) галлик қышқылымен<br />
стандартты ерітінді арқылы салыстырмалы түрде концентрациясы анықталды.<br />
Тұтас полифенол мөлшері жапырақтың балғын массасының (БМ) мг г -1<br />
галлик қышқылы эквиваленті бойынша өлшенді.<br />
Несеп қышқылын, аллантоин (АЛН) және аллантоин қышқылын (АЛҚ)<br />
анализдеу<br />
Сақталған үлгілерді арнайы үккіште 80%- этанолда 1:4 (с/қ) қатынасы<br />
бойынша ұсақталады. Алынған экстрактілерді 14, 000 айналымда, 20 мин,<br />
4°С-та центрифугалаймыз (Z233 MK-2, HERMLE). Жиналған супернатант<br />
уреидтерді анықтау үшін, аллантоин мен аллантоин қышқылдарын стандарт<br />
ретінде алып, Vogels and Van der Drift (1970ж) әдістері бойынша зерттелді<br />
[172].<br />
46
Change language