Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Bradford ermittelt (Kapitel 3.5.2). Um Störungen der Bradford-Messung durch DMSO zu
vermeiden, wurde dem Elutionspuffer kein DMSO zugesetzt. Parallel wurden 100 µl der
Elution mit 100 µl Isopropanol inkl. 0,7 vol% Perchlorsäure versetzt, gründlich gevortext und
nach Sedimentation des Enzyms (Zentrifugation: 1-5 min. 13.000 Upm) auf evt. Aldehydoder
Benzoin-Rückstände mittels HPLC-Analytik (Kapitel 3.8.1) untersucht. Die relative
Aktivität in den Inaktivierungsansätzen und eluierten Proben wurde wie in Kapitel 3.10.3
beschrieben ermittelt. Es wurden verschiedene Verdünnungen der Proben eingesetzt wurden
(z.B. 1:1, 1:2, 1:5, 1:10 und 1:20) um je nach Aktivität oberhalb der Nachweisgrenze zu
messen. Die ermittelten Umsätze wurden mit einer Kontrolle ohne Zusatz von Aldehyden
verglichen (0,5 mg/ml in Reaktionspuffer).
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