Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
können, wurde die Inaktivierungsrate bei pH 8 in zwei weiteren unabhängigen Experimenten
für 4-Chlorbenzaldehyd und 3,5-Dimethoxybenzaldehyd ermittelt (Tabelle 11).
Tabelle 11: Desaktivierungskonstanten und berechnete Halbwertszeiten für Benzaldehyd, 3,5-Dimethoxybenzaldehyd
und 4-Chlorbenzaldehyd. Inaktivierungsansatz: 20 µg/ml BAL in 50 mM TEA Puffer, pH 8;
0,5 mM ThDP, 2,5 mM MgSO 4 ; 30 vol% DMSO; 2 mM Substrat; T=25 °C.
Substrat Desaktivierungskonstante [% min -1 ] Halbwertszeit [min]
1. 2. 3. Mittlerer k des 1. 2. 3. Mittlere t 1/2
BA 2,68 1,68 3,23 2,53 ± 0,79 25,9 41,3 21,5 29,5 ± 10,4
3,5-DMBA 2,55 2,63 3,00 2,73 ± 0,24 27,2 26,4 23,1 25,5 ± 2,2
4-ClBA 4,18 3,30 2,94 3,47 ± 0,64 16,6 21,0 23,6 20,4 ± 3,5
Unter Berücksichtigung der empirischen Standardabweichung, ergibt sich kein signifikanter
Unterschied in der Inaktivierungsrate der BAL mit den drei gewählten Benzaldehyden bei
pH 8. Inwiefern sich jedoch Unterschiede bei anderen pH-Werten zeigen würden, sollte im
Folgenden geprüft werden.
Bei Betrachtung der Stabilität der BAL gegenüber 4-Chlorbenzaldehyd über ein breiteres pH-
Spektrum, wird der Einfluss des pH-Werts auf die Inaktivierung noch deutlicher als zuvor
(Abb. 61 C). In TEA-Puffer (pH 6) (k des : 0,2% min -1 ), konnte sogar eine Stabilisierung um
fast das 20-Fache gegenüber den Inaktivierungsanalysen bei pH 8 (k des : 3,5% min -1 ) erreicht
werden; bei pH 7 (k des :1,0% min -1 ) ist die Stabilität 3,5-4 fach höher. Während die Inkubation
bei pH 9 (k des : 5,7% min -1 ) zu einer deutlich schnelleren Inaktivierung als bei pH 8 führt. Da
mit den anderen Substraten, die eine Substitution in der para-Position tragen, bei pH 7 eine
ähnliche Stabilisierung erreicht werden konnte, ist für diese ebenfalls eine ähnliche
Stabilisierung durch weiteres Absenken des pH anzunehmen.
Gegenüber Benzaldehyd war bei pH 6 keine Ligaseaktivität der BAL detektierbar, deshalb
wurde die Stabilität hier nicht bestimmt (Abb. 61 A). Mit einem Puffer-pH von 7 (k des :
0,9% min -1 ) konnte eine etwa um das 2,5-fach erhöhte Stabilität der BAL gegenüber pH 8
(k des = 2,5% min -1 ) erreicht werden. Durch Senkung des pH-Werts kann also auch gegenüber
Benzaldehyd eine Stabilisierung erreicht werden. Im Vergleich zu den Untersuchungen mit
4-Chlorbenzaldehyd konnte keine signifikant erhöhte Inaktivierung mit Benzaldehyd bei pH 9
beobachtet werden.
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