Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Mit Hilfe von Fluoreszenzphotometern kann eine Probe bei festgelegten Wellenlängen
angeregt und die Emission ermittelt werden. In Abb. 20 ist der prinzipielle Aufbau eines
Fluoreszenzphotometers dargestellt.
Abb. 20: Schematischer Aufbau eines Fluoreszenzphotometers (nach Lakowicz, 1999). In vielen
Fluoreszenzphotometern dient eine Xenon Lampe als Lichtquelle. Das Anregungslicht wird durch den
Anregungsmonochromator geleitet und über ein Gitter (grau) die gewünschte Wellenlänge eingestellt. Durch den
Spalt kann die Streuung des Lichtes kontrolliert werden. Bei kleinen Spaltbreiten ist die Anregungswellenlänge
exakter, bei weit geöffnetem Spalt ist die Lichtmenge welche die Probe erreicht größer. Treffen die Photonen auf
die Probe wird Licht in alle Richtungen emittiert. Normalerweise wird die Emission im 90° Winkel zum
Anregungslicht gemessen. Da niemals nur Licht einer Wellenlänge emittiert wird, muss das Emissionslicht
ebenfalls durch einen Monochromator geleitet werden, um die zu messende Wellenlänge herauszufiltern. Die
Streuung des Lichtes wird ebenfalls über einen Spalt reguliert. Mittels eines Photomultipliers werden die
emittierten Photonen aufgefangen und in ein elektrisches Signal umgewandelt.
Der fluoreszenzphotometrische Aktivitätstest basiert auf den von Zavrel und Schmidt (Zavrel
et al., 2008) an der RWTH-Aachen entwickelten Test zur Messung von Reaktionsverläufen
der BAL zur Ligaseaktivität mit 3,5-Dimethoxybenzaldehyd (DMBA) zu 3,3´,5,5´-Tetramethoxybenzoin
(TMBZ). Bei diesem Test werden die fluoreszierenden Eigenschaften des
Substrates DMBA genutzt, um den Substratverbrauch zu verfolgen (Abb. 21).
BAL
Abb. 21: DMBA-Ligasetest. Zwei Moleküle DMBA werden zu einem Molekül TMBZ verknüpft.
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