Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
Mit 4 mM DMBA wird eine Intensität von fast 200.000 cps erreicht, dies entspricht nur etwa
1/10 des maximalen Messbereichs des Geräts (2x10 6 cps), durch die Wahl größerer
Spaltbreiten sollte das gemessene Signal erhöht werden. Spaltbreiten von ± 1,3-1,5 nm
scheinen am besten geeignet für die Messung von DMBA zu sein (Abb. 40), hier liegt das
Emissionsmaximum zwischen 8x10 5 und 1,5x10 6 cps. Bei Betrachtung des Emissionsspektrum
fällt auf, dass das tatsächliche Emissionsmaximum eher bei 460 nm als bei 470 nm
liegt, weshalb die Emission in den folgenden Messungen bei 460 nm detektiert wurde.
6x10 6
5x10 6
1,0 nm
1,3 nm
1,5 nm
2,0 nm
Intensität (cps)
4x10 6
3x10 6
2x10 6
1x10 6
0
400 420 440 460 480 500 520 540
Wellenlänge (nm)
Abb. 40: Emissionsspektrum bei verschiedenen Spaltbreiten mit 4 mM DMBA. 50 mM TEA-Puffer, pH 8;
2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 20 vol% DMSO. Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm), Anregung: 350 nm,
Emission: 400-550 nm, Spaltbreiten: ± 1-2 nm, T=25 °C.
Nachdem die Bedingungen für den Fluoreszenztest am Fluorolog 3-22 festgelegt waren,
wurde eine Kalibrierung durchgeführt. DMBA-Konzentrationen von 0-4 mM wurden dreimal
vermessen und eine Kalibrierkurve erstellt (Abb. 35).
Intensität (cps)
1x10 6
8x10 5
6x10 5
4x10 5
2x10 5
0
0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 3,5 4,0
DMBA (mM)
DMBA (mM)
4,0
3,5
3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0 2x10 5 4x10 5 6x10 5 8x10 5 1x10 6
Intensität (cps)
Abb. 41: Kalibrierung zur Quantifizierung der DMBA-Konzentration mit 0-4 mM DMBA. 50 mM TEA-
Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 20 vol% DMSO, Halbmikroküvette (SD: 4x10 mm), „Front
Face“, Anregung: 350 nm, Emission: 460 nm, Spaltbreiten: ± 1,3 nm T=25 °C. Links: gemessene Intensität
abhängig von der DMBA-Konzentration, n = 3. Rechts: DMBA-Konzentration in Abhängigkeit von der
gemessenen Intensität.. Die Anpassung der Daten erfolgte Exponential (1. Ordnung).
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