Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
sprechend wäre mit beiden Substraten nach 2 Stunden eine fast vollständige Inaktivierung der
BAL zu erwarten gewesen. Gleiches gilt für Benzaldehyd und 3,5-Dimethoxybenzaldehyd.
Im Rahmen der Messgenauigkeit weichen die ermittelten Inaktivierungsraten und Halbwertszeiten
nur geringfügig von den Versuchen mit 2-Chlorbenzaldehyd ab. Zu den vorherigen
Inaktivierungsexperimenten und den Reaktivierungsversuchen gibt es nur einen Unterschied:
die Enzymkonzentration. Bei den in Kapitel 4.2.1 beschriebenen Versuchen wurden
0,02 mg/ml BAL mit 2 mM Substrat inkubiert, in den Reaktivierungsexperimenten wurden
0,5 mg/ml BAL mit 2 mM Substrat inkubiert.
Fazit: Eine denkbare Erklärung für die Differenzen bei der Reaktivierung wäre z.B. ein
zweiter irreversibler Inaktivierungsschritt, wie der Verlust der strukturellen Integrität, der
abhängig vom Substrat und vom pH eingeleitet wird. Möglicherweise wird aber auch die
initiale Inaktivierung selbst durch unterschiedliche Prozesse hervorgerufen, welche abhängig
vom eingesetzten Substrat, zu verschiedenen reversiblen und irreversiblen Inaktivierungsmechanismen
führen könnten. Das in manchen Fällen abweichende Verhalten (mit 0,5 mg/ml
BAL) von den zuvor bestimmten Desaktivierungskonstanten (mit 0,02 mg/ml BAL) weist
darauf hin, dass die Inaktivierung nicht nur abhängig vom Substrat selbst und dem pH-Wert,
sondern auch von dem Enzym-Substrat Verhältnis ist. Weiterhin deuten die Ergebnisse darauf
hin, dass sich für die maximale Inaktivierungsrate das Enzym-Substrat Verhältnis für jedes
Substrat unterscheidet. Im folgenden Kapitel soll die Inaktivierung in Abhängigkeit vom
Enzym-Substrat Verhältnis für Benzaldehyd, 3,5-Dimethoxybenzaldehyd und 4-Chlorbenzaldehyd
untersucht werden.
4.2.4 Abhängigkeit der Inaktivierung vom Enzym-Substrat Verhältnis
Zur Überprüfung, ob die Inaktivierungsrate der BAL tatsächlich mit dem Enzym-Substrat
Verhältnis korreliert, wurden zunächst die Desaktivierungskonstanten bei konstanter BAL-
Konzentration und variabler 4-Chlorbenzaldehyd untersucht. Wobei 0,02 mg/ml BAL mit
unterschiedlichen Substratkonzentrationen von 0,002-20 mM 4-Chlorbenzaldehyd, für eine
Stunde bis 7 Tage inkubiert wurden. Anschließend wurde umgekehrt die Enzymkonzentration
variiert, während die Substratkonzentration konstant blieb. Ansonsten entsprach die Vorgehensweise
den vorangegangenen Experimenten.
In Abb. 62 A ist die Inaktivierung in Abhängigkeit von der eingesetzten Substratkonzentration
dargestellt. Bis etwa 1 mM steigt die Geschwindigkeit der Inaktivierung mit
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