Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
konzentrationen (50 µg/ml) konnte ohne DMSO Zugabe keine Aktivität nachgewiesen
werden (Kocot, 2010). Ein Vergleich der Stabilitäten in Puffer und mit 30 vol% DMSO zeigt,
dass die HisBALΔ in Puffer ohne Kosolvents schneller an Aktivität verliert als bei Inkubation
mit Kosolvents(Abb. 77 A). Für die Messung der relativen Aktivität wurde jeweils eine
Substratlösung mit 20 mM 4-Chlorbenzaldehyd und 30 vol% DMSO zu den Proben gegeben,
um die Aktivität der Varianten zu gewährleisten. Innerhalb von 2 min verlief die Reaktion mit
der gewählten Enzymkonzentration für alle Enzymvarianten linear (ohne Abb.), so dass die
Ermittlung des Umsatzes nach 2 Minuten als Bezugsgröße für die relative Aktivität verwendet
werden konnte.
A
1,0
ohne DMSO
30 vol% DMSO
B
1,0
ohne DMSO
30 vol% DMSO
relative Aktivität
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0 1,5 2,5 20,5 24 44,5 72,5
Zeit [h]
relative Aktivität
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0 1,5 2,5 20,5 24 44,5 72,5
Zeit [h]
C
1,0
ohne DMSO
30 vol% DMSO
relative Aktivität
0,8
0,6
0,4
0,2
0,0
0 1,5 2,5 20,5 24 44,5 72,5
Zeit [h]
Abb. 77: Stabilität der Deletionsvarianten HisBALΔ (A), BALΔHis (B) und der Wildtyp BAL (C) in
Puffer ohne Zugabe von DMSO und mit 30 vol% DMSO. Lagerung: 20 µg/ml Enzym in 50 mM TEA-
Puffer, pH 8; 0,5 mM ThDP, 2,5 mM MgSO 4 ; ohne und mit 30 vol% DMSO; T=25 °C. Ermittlung der Aktivität:
4 µg/ml Enzym in 50 mM TEA-Puffer, pH 8; 0,5 mM ThDP, 2,5 mM MgSO 4 ; 30 vol% DMSO; 20 mM
4-Chlorbenzaldehyd; T=25 °C.
Innerhalb des Zeitraums vom Lösen des gereinigten Lyophilisats bis zur Messung der
Aktivität (max. 5 Stunden) ist die Stabilität der BAL in reinem Puffer gut genug, um eine
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