Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
Indes wird deutlich, wie wichtig die Analyse aller Faktoren auf die Enzymstabilität ist, um
hinsichtlich spezifischer Parameter qualitative und quantitative Aussagen treffen zu können.
Fazit: Die bisherigen Untersuchen haben gezeigt, dass der Rührprozess, sowie die Phasengrenzfläche
zur Inaktivierung der BAL beitragen. Die Emulgierung der beiden Phasen
beschleunigt die Inaktivierung um etwa den Faktor vier, was vermutlich auf Rühreffekte und
die Vergrößerung der Grenzfläche zurückzuführen ist. Diese Daten liegen etwa in der
Größenordnung, welche Kühl für die Stabilität der BAL in Zweiphasensystemen mit
getrennten und emulgierten Phasen beschrieben hat. Je nach Größe der Grenzfläche (bei
getrennten Phasen), wies Kühl mit MTBE als zweiter Phase eine um das 1,8 bis fast 9-Fache
beschleunigte Inaktivierung durch Emulgierung der beiden Phasen nach (Kühl, 2009). Die
unterschiedlichen Rührgeschwindigkeiten (90 und 700 Upm) wurden dabei nicht mit
einbezogen. Insgesamt bleibt festzuhalten, dass die BAL in wässrig-organischen Zweiphasenund
Emulsionssystemen ihre Aktivität über einen Zeitraum von mehreren Stunden aufrechterhalten
kann.
4.1.4 Einfluss von Substraten auf die Stabilität der BAL
Anschließend sollte der Einfluss der aromatischen Aldehyde auf die Stabilität der BAL
untersucht werden. Die ersten Versuche hierzu wurden von Carmen Kocot im Rahmen ihrer
Diplomarbeit durchgeführt (Kocot, 2010). Um zum einen die Löslichkeit der Aldehyde zu
gewährleisten und zum anderen eine Präzipitation der entstehenden Benzoin-Derivate zu
minimieren wurde dem Puffer 30 vol% DMSO zugesetzt. Vor und während der Inkubation
der BAL mit den Aldehyden (Benzaldehyd, 3-Methoxybenzaldehyd und 2-Chlorbenzaldehyd)
wurde die Aktivität der BAL mittels des fluoreszenzphotometrischen Tests ermittelt (Kapitel
3.9.1.3.1).
Bereits bei geringen Substratkonzentrationen von 4-5 mM zeigte die BAL eine schnelle
Inaktivierung innerhalb weniger Minuten (10-60 min). Bei höheren Substratkonzentrationen
(10-40 mM) konnte kein Unterschied in der Inaktivierung ermittelt werden. Auffällig war,
dass die Inaktivierung für die verschiedenen Substrate unterschiedlich schnell verlief. Mit
2-Chlorbenzaldehyd war innerhalb von 10 Minuten keine Aktivität mehr nachweisbar,
während mit Benzaldehyd und 3-Methoxybenzaldehyd die Restaktivität nach 60 Minuten
noch etwa 30-40% betrug. Dies gab erste Hinweise darauf, dass die unterschiedlichen
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