Helmholtz-Gemeinschaft

Ergebnisse & Diskussion
Aldehyden, ist aber aufgrund der geringen Nukleophilie kaum wahrscheinlich (persönliche
Mitteilung: Apl. Prof. Dr. Martina Pohl, IBT2). Eine relevante Inaktivierung über eine
kovalente Bindung der Benzaldehyde an die BAL ist daher äußerst unwahrscheinlich. Alle
bisherigen Ergebnisse weisen aber auf eine pH-abhängige, reversible Interaktion der
Benzaldehyd-Derivate mit der BAL hin. Vermutlich führen andere Wechselwirkungen (z.B.
hydrophobe oder ionische) zu einer initialen Inaktivierung der BAL und anschließend zu einer
nicht oder nur teilweise reversiblen Konformationsänderung.
4.3.3 Überprüfung von strukturell der BFD angeglichenen BAL-Varianten
Da die BFDH281A gegenüber den aromatischen Aldehyden keine nachweisbare Sensitivität
in einem Zeitraum von 4-5 Tagen zeigt, sollte auch die Stabilität von, der BFD-Struktur
angeglichenen, BAL-Varianten gegenüber den aromatischen Aldehyden überprüft werden.
4.3.3.1 Planung und Charakterisierung von BFD ähnlichen BAL Varianten
Im Rahmen ihrer Diplomarbeit wurden von Carmen Kocot die Struktur-Funktionsbeziehungen
der BFDH281A und der BAL hinsichtlich ihrer Aktivität und Stabilität
gegenüber aromatischen Aldehyden untersucht (Kocot, 2010). Für die BAL wurde im
Gegensatz zur BFDH281A die Produktfreisetzung aus dem aktiven Zentrum als
geschwindigkeitslimitierender Reaktionsschritt beschrieben (Kokova et al., 2009).
BFD
BAL
Abb. 75: Oberflächendarstellung der Röntgenkristallstruktur und Vergleich der Substratkanäle der BFD
(PDB: 2w3v, links) sowie der BAL (PDB: 2AG0, mitte) und einem Modell bei dem der C-Terminus
entfernt wurde (rechts). Die Monomere sind in dunkel- und hellgrau, das im aktiven Zentrum lokalisierte
ThDP ist rot dargestellt. Die C-terminale -Helix (AS 551-555) der BAL ist in orange markiert und die helikale
Struktur angedeutet (mitte). Eine Untereinheit der BAL besteht aus 563 AS, die Auflösung der Röntgenstruktur
war aber nur bis 555 AS möglich. Die Aminosäurereste 556 (die Position ist durch einen weißen Pfeil markiert)
bis 563 bilden eine flexible Struktur aus, welche röntgenkristallographisch nicht aufgelöst werden kann
(Mosbacher et al., 2005). Durch Entfernung des C-Terminus (ab AS 551) wird der Zugang zum aktiven Zentrum
der BAL erweitert (rechts). Die Abbildungen wurden mit dem Programm PyMOL erstellt
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