Helmholtz-Gemeinschaft

Material & Methoden
mehr als das Doppelte erhöht. Außerdem ist hier eine weitere Verschiebung des Anregungsspektrums
in Richtung des Absorptionsmaximums von DMBA zu beobachten. Bereits durch
die veränderte Orientierung der Küvette im Anregungslicht findet eine Verschiebung des
Anregungsmaximums auf etwa 354 nm statt. Durch Zuschalten der Front Face Option liegt
das Anregungsmaximum bei etwa 349 nm. Diese Beobachtungen zeigen, welche Auswirkung
die Wahl der Küvettengeometrie sowie der Geräteeinstellungen auf die Fluoreszenzmessungen
haben.
2,0x10 5 10x4 mM RA
10x4 mM FF
4x10 mm RA
4x10 mM FF
1,5x10 5
Intensität (cps)
1,0x10 5
5,0x10 4
0,0
300 320 340 360 380 400
Wellenlänge (nm)
Abb. 37: Vergleich des Anregungsspektrums bei verschiedenen Küvettenorientierungen und der „Front
Face“ (FF) Messung zur rechtwinkligen Messung (Right Angle, RA) mit 3 mM DMBA. 50 mM TEA-
Puffer, pH 8; 2,5 mM MgSO 4 ; 0,5 mM ThDP; 20 vol% DMSO. Halbmikroküvette (SD: 10x4 mm sowie
4x10 mm), Anregung: 300-400 nm, Emission: 470 nm, Spaltbreiten: ± 1 nm, T=25 °C. Die Anregungsoptima
sind durch Geraden markiert.
Wie die vorangegangenen Versuche bereits gezeigt haben, bedeutet eine höhere Fluoreszenz
aber nicht automatisch eine Verbesserung in der Steigung der Intensität bei steigender
DMBA-Konzentration. Ein Vergleich der Anregungsspektren bei verschiedenen DMBA-
Konzentrationen mit der rechtwinkligen sowie der Front Face Messung und der SD von
4 mm im Anregungslicht zeigt aber eindeutig eine bessere Auftrennung der Signale
(Abb. 38). Durch die Front Face Messung wurde nicht nur eine Erhöhung der Fluoreszenzintensität
und eine Verschiebung des Anregungsmaximums erreicht, sondern auch die
Differenz in der Fluoreszenzintensität nimmt zu. Eine Anregung bei 360 nm hat bei Front
Face Messungen keinen Sinn mehr, da die Differenz in der gemessenen Fluoreszenzintensität
bei 350 nm wesentlich größer ist.
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