universita - Clinica pediatrica - Università degli Studi di Trieste
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La seconda porzione del campione bioptico, viene congelata in azoto liquido e conservata<br />
a –80°C. con il citocromo congelatore, si fanno delle sezioni <strong>di</strong> 5 μm le quali, dopo<br />
fissazione in acetone per 10 minuti e in cloroformio per altri 30 minuti, vengono lavate,<br />
per tre volte con il tampone tris a pH 7,4, e successivamente ricoperte per 16 ore con una<br />
soluzione 1:100, contenente anticorpi monoclonali, che riconoscono le regioni costanti<br />
della catena δ del TCR presente sui linfociti T. Con questa processazione si può<br />
riconoscere la percentuale <strong>di</strong> T linfociti γ/δ positivi.L’osservazione si effettua su un<br />
millimetro lineare <strong>di</strong> biopsia utilizzando un microscopio luce a 100 ingran<strong>di</strong>menti che<br />
permetterà <strong>di</strong> in<strong>di</strong>viduare la percentuale <strong>di</strong> linfociti Τ ( CD3+) con recettore <strong>di</strong> tipo γ/δ tra<br />
gli enterociti. La densità <strong>di</strong> linfociti T con recettore <strong>di</strong> tipo γ/δ viene espressa tramite la<br />
percentuale <strong>di</strong> questi sulla totalità dei linfociti T presenti nella mucosa e valori superiori al<br />
40% sono da considerarsi patologici. Infatti normalmente i linfociti che sono presenti nella<br />
porzione intraepiteliale e nella lamina propria della mucosa intestinale sono <strong>di</strong> tipo α/β e<br />
la percentuale <strong>di</strong> γ/δ risulta inferiore al 10%.<br />
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