Appunti Biochmica Applicata CTF - Capitolo1 - Omero

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Assorbanza a 280 nm e 260 nm Se le proteine sono contaminate conacidi nucleici che assorbono a 260 conestensione anche a 280 si può applicarela seguente formula che correggeragionevolmente bene per il contenutoin acidi nucleici:proteina (mg/ml): 1,55A 280 – 0,76A 260
Metodo del Biureto Il metodo fu sviluppato a seguito dell’osservazione che il biureto reagisce con una soluzione alcalina di CuSO 4 per dare un complesso color porpora.RNNCU+2OH 2 N-CO-CO-NH 2 biuretoONNR Lo ione Cu 2+ forma un complesso di coordinazione con quattro gruppinucleofilici –NH che nella reazione con le proteine sono dati dailegami peptidici tra gli amminoacidi. Riduzione di Cu 2+ a Cu + ⇒viraggio dal blu al violetto. Il complesso ha due picchi di assorbimento a 330 nm e 545 nm. Composti che contengono due dei gruppi qui sotto riportati legatiattraverso un atomo di carbonio o di azoto producono una reazionesimile e quindi interferiscono:-CONH 2-CH 2 NH 2-C(NH)NH 2-CSNH 2
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Cromatografia di ripartizione E’
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