Appunti Biochmica Applicata CTF - Capitolo1 - Omero

Per attaccare il ligando alla matrice si fa un trattamentopreliminare di quest'ultima con CNBr a pH 11. Le condizionidi reazione e il rapporto tra i reagenti determinano ilnumero di molecole di ligando che si legano ad ogniparticella di matrice. In commercio sono disponibilipolisaccaridi già attivati con CNBr quali, ad esempio, ilSepharose 4B e 6B; sono disponibili sul mercato anche iltiopropildestrano, il tiopropilagarosio ed il tresile(2,2,2-trifluoroetansolfonil)destrano. E' possibile preparare un ligando che abbia una specificitàassoluta o una selettività per un determinato gruppo chimico:ligandi gruppo-specifici utilizzati in cromatografia diaffinità sono nucleotidi, avidina, eparina, proteine A eG, concanavalina A, poli(A) e Cibacron Blue F3G-A. E' importante che siano evitate interazioni aspecifiche conaltre proteine che non si assorbano alla colonnacontemporaneamente a quella da purificare. Il legame tramatrice e ligando, o tra braccio spaziatore e ligando, deveessere un legame stabile, in modo da permettere il riutilizzodella colonna, e, al contrario, deve essere labile quello traligando e proteina.