View/Open - JUWEL - Forschungszentrum Jülich

Die frühestmögliche Passage von WJC aus den Zellkulturplatten konnte nach dreiwöchiger
Inkubation durchgeführt werden. Zu diesem Zeitpunkt konnte bereits deutlich zwischen
"fibroblastähnlichen" und "endothelähnlichen" Zellen unterschieden werden und damit die
gewünschten WJC ausgewählt werden. 10 – 40 % der ausgesäten Gewebefragmente
wiesen dabei die erwünschte Morphologie und Wachstumsgeschwindigkeit auf.
Hochrechnungen der Zellzahlen über einen Kulturzeitraum von insgesamt 7 Wochen
ergaben, dass in dieser Zeit bei Aussaat einer 48-Well-Zellkulturplatte minimal 2,3x10 6 und
maximal 9,7x10 7 Zellen gewonnen werden können. Die große Differenz zwischen diesen
Zahlen beruht dabei sowohl auf der Spendervariabilität als auch auf dem für die einzelnen
Gewebestücke sehr unterschiedlichen Wachstum. Bei ausreichend hoher Anzahl der
ausgesäten Gewebestücke könnten diese Effekte jedoch kompensiert werden. Für eine
Zellkulturplatte mit 48 Vertiefungen genügt ca. 1 cm Nabelschnur, eventuell weniger. Die
Nabelschnur erreicht jedoch eine Länge von 50 – 60 cm (Sadler T. W., 1998), weswegen es
unproblematisch wäre, eine deutlich höhere Anzahl Gewebefragmente auf Zellkulturplatten
auszusäen. Dadurch könnte problemlos die für die Kokultur mit HSC im klinischen Maßstab
benötigte Feederzellzahl von 2,8x10 7 aus jeder Nabelschnur erreicht werden.
Außerdem ist es möglich, die Präparationsprozedur so zu modifizieren, dass sich die
Inkubationsdauer verringert. Eine optische Kontrolle nach der initialen dreiwöchigen
Inkubation der Gewebestücke könnte zeigen, welche Proben die gewünschte Morphologie
und Zelldichte aufweisen. "Endothelähnliche" Zellen und auch die selten vorkommenden
Kontaminationen lassen sich dabei sehr einfach aussortieren. Die ausgewählten Zellen
könnten dann von den Zellkulturplatten abgelöst und vereinigt werden. Bei einer
ausreichenden Anzahl ausgesäter Gewebefragmente sollte die erreichte Gesamtzellzahl
dann bereits genügen, um die Zellen zu kryokonservieren. Der Zeitraum von der Präparation
bis zur Kryokonservierung der Zellen für die spätere therapeutische Anwendung ließe sich
damit auf 3 Wochen verkürzen, der Arbeitsaufwand für weitere Passagen entfiele. Eine
weiterführende Kultur der Zellen über 1 – 2 Passagen (Zeitraum: 1 – 4 Wochen) wäre jedoch
134