View/Open - JUWEL - Forschungszentrum Jülich

Fibroblasten-Kolonien bildende Zellen (colony-forming units – fibroblast = CFU-F)
Ein Indiz für das Vorhandensein von MSC in Knochenmarkproben ist die Fähigkeit dieser
Zellen, bei der Aussaat sehr geringer Zellzahlen fibroblastförmige Kolonien (CFU-F) zu
bilden (Castro-Malaspina H. et al., 1980). Um zu untersuchen, ob auch WJC diese
Eigenschaft aufweisen, wurden aus zwei verschiedenen Gewebestücken der Nabelschnur
des selben Spenders gewonnene WJC (Passage 3) mit Dichten zwischen 1x10 2 und 1x10 4
Zellen/cm 2 auf Zellkulturflaschen der Fläche 25 cm 2 in ECGM bzw. DMEM + 10 % FCS
ausgesät und zwei Wochen im Brutschrank inkubiert. Anschließend wurden die Zellen fixiert
und mit Giemsa-Lösung gefärbt (Abbildung E-11).
A D G J
B
C
Abbildung E-11: CFU-F-Assay WJC – Fotos von Ausschnitten aus Kulturen der Aussaatdichten 100
(oberste Reihe), 500 (mittlere Reihe) und 1000 (untere Reihe) Zellen / cm 2 , Charge 1 & 2 vom selben
Spender, alle Passage 3; A – C: Zellen der Charge 1, Medium: DMEM; D – F: Charge 1, ECGM; G – I:
Charge 2, DMEM; J – L: Charge 2, ECGM; alle Proben mit Methanol fixiert und Giemsa-gefärbt,
Originalvergrößerung 10fach
CFU-F konnten in keiner der getesteten Zelldichten nachgewiesen werden, wenn auch sehr
vereinzelt CFU-F-ähnliche Zellansammlungen beobachtet wurden (Abbildung E-11 J). Die
Zellen hatten sich jedoch in beiden untersuchten Medien auf dem Boden der
Zellkulturgefäße angesiedelt und zeigten trotz der niedrigen Aussaatdichte ihre typische
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E
F
H
I
K
L