View/Open - JUWEL - Forschungszentrum Jülich

der Zellsuspension bzw. die erwartete Gesamtzellzahl für eine Zählung mit den
automatischen Zellzählgeräten, die große Probenvolumina erfordern, zu gering waren. Das
zu Anfang der Arbeit eingesetzte CASY konnte für spätere Messungen aufgrund eines
Defektes nicht mehr verwendet werden und wurde daher durch das ViCell XR ersetzt. Beide
Geräte lieferten äquivalente Ergebnisse bei ähnlicher Probengröße und konnten daher für
die gleichen Experimente benutzt werden. Die im Einzelfall für ein bestimmtes Experiment
angewendeten Methoden sind in den jeweiligen Textabschnitten angegeben.
Neubauer-Zählkammer
Für die Zählung in der Neubauer-Zählkammer wurde den zu zählenden Zellen ein Aliquot
entnommen (üblicherweise 50 µL) und mit der gleichen Menge Trypanblau versetzt. Die
Zählkammer wurde vorbereitet, indem das Deckglas so auf die Kammer gesetzt wurde, dass
sich auf den leicht befeuchteten Auflageflächen die so genannten Newton'schen Ringe
bildeten. Dadurch wurde garantiert, dass die Höhe der Kammer überall gleichmäßig war und
das Kammervolumen dem vom Hersteller angegebenen entsprach. Die mit dem Trypanblau
gleichmäßig vermischte Zellsuspension wurde vorsichtig an den Rand der Kammer
aufgetragen, so dass sich die Suspension in die Kammer hineinsaugte und luftblasenfrei die
Fläche bedeckte. Die Zählkammer wurde auf einem Lichtmikroskop bei 100facher
Gesamtvergrößerung unter Phasenkontrast mikroskopiert. Die Zellzahl auf jeweils 4
Großquadraten wurde bestimmt. Hierbei wurden die mit Trypanblau angefärbten und somit
blau erscheinenden Zellen als tot, die ungefärbten Zellen als lebend gezählt. Die auf den
einzelnen Großquadraten ermittelten Zellzahlen wurden aufsummiert und die Zelldichte in
der Ursprungslösung nach folgender Formel bestimmt:
Zellzahl in der Ursprungslösung/mL = (Gesamtzahl lebende Zellen auf 4 Großquadraten / 4
Großquadrate) x Verdünnungsfaktor x Kammerfaktor
Z/mL = (durchschnittliche Lebendzellzahl/Großquadrat) x 2 x 10 4
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