View/Open - JUWEL - Forschungszentrum Jülich

Zellen, enthalten sind (s. 4.2.1). Auch die wichtigsten Marker für Subpopulationen von T-
Zellen (CD4 und CD8) konnten nicht detektiert werden. Daher ist anzunehmen, dass keine
Verunreinigung der Feederzellen mit T-Zellen vorliegt und eine Transplantation der
Feederzellen somit keine GVHD hervorrufen kann. Der letztgültige Beweis hierfür sollte
jedoch vor einem möglichen klinischen Einsatz noch in einer tierexperimentellen Studie
erbracht werden.
5.2.3 Kompatibilität der potenziellen Feederzellen zu HSC-Medium
Wie bereits zuvor erwähnt ist es für die klinische Anwendung von Zelltherapeutika von
Vorteil, wenn die Zellen in serumfreiem, optimalerweise komplett von tierischen
Bestandteilen freiem, Medium kultiviert werden. Zwar sind die Feederzellen vor der Kokultur
in serumhaltigem Medium kultiviert worden, aber die Kokulturversuche sollten trotzdem in
serumfreiem kliniktauglichem Medium durchgeführt werden, um die Bedingungen bei der
Anwendung möglichst genau zu simulieren. Darum wurde vor den eigentlichen
Kokulturversuchen getestet, ob die potenziellen Feederzellen auch in serumfreiem Medium,
das die für HSC benötigten Zytokine enthält, überleben können. Dabei sollten die Zellen
weder zu schnelles Wachstum zeigen noch zu viele Nährstoffe aus dem Medium
verbrauchen. Auch die Akkumulation hoher Konzentrationen potenziell toxischer Metabolite
im Medium sollte vermieden werden. Als Referenz für tolerierbare Werte wurde die murine
stromale Zelllinie Sl/Sl mod mitgeführt, die in früheren Kokulturexperimenten die Expansion
von HSC gut unterstützt hatte (Jelinek N., 2001, Kokerbeck D., 2002, Fischbach T., 2003).
Wie vor Kokulturversuchen wurden diese Zellen auch vor der Wachstums- und
Verbrauchsanalyse in HSC-Medium mit 80 Gray bestrahlt, um ihr Wachstum zu inhibieren.
Die Primärzellen dagegen wurden unbestrahlt eingesetzt, um zu testen, ob ihre mögliche
Proliferation in HSC-Medium die Expansion der HSC gefährden würde.
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