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vielleicht auch durch die Beschichtung der Kulturgefäße erreicht werden. Weitere Experimente könnten klären, ob sich die Expansion der HSC verbessert, wenn nicht nur einer der untersuchten Feederzelltypen eingesetzt wird, sondern eine Mischung aus den verschiedenen Feederzellen. Im Knochenmark, wo die HSC im Körper lokalisiert sind, befinden sich auch unterschiedliche Zelltypen in ihrer Umgebung, die durch ihre Produktion von Wachstumsfaktoren und Molekülen der extrazellulären Matrix zur Erhaltung und Regulation der HSC beitragen (Dorshkind K., 1990). Bei einer simultanen Verwendung mehrerer Feederzelltypen könnten sich somit Synergieeffekte ergeben, da die natürliche Umgebung der HSC präziser nachgebildet würde. Allerdings würde ein solch komplexer Aufbau Schwierigkeiten beim klinischen Einsatz mit sich bringen. Er könnte jedoch ein nützliches Modell für die Erforschung der Wechselwirkungen zwischen HSC und den sie umgebenden Zellen in der Stammzellnische bieten, eventuell auch im Hinblick auf die Evaluierung neuer Pharmazeutika. Da für WJC gezeigt werden konnte, dass sich auf einfache Weise in kurzer Zeit hohe Zellzahlen generieren lassen, sollte überlegt werden, diese Zellen nicht nur für die Kokultur mit HSC, sondern auch für andere Ansätze der Zelltherapie nutzbar zu machen. Möglich wäre etwa ihr Einsatz im Tissue Engineering für die Reparatur von Herzscheidewanddefekten, wie sie häufig bei Neugeborenen vorkommen. Da solche Defekte schon pränatal diagnostiziert werden können, könnten die Zellen nach der Geburt des Kindes gewonnen und nach kurzer Kultivierungsdauer autolog eingesetzt werden. Eine andere Verwendung könnte die Regenerierung von Muskelgewebe z.B. im Herzmuskel nach Infarkten sein: Da WJC aufgrund ihrer Herkunft Myofibroblasten sein könnten, die sich auf dem Differenzierungsweg zu glatten Muskelzellen befinden, läge diese Möglichkeit nahe. Nicht nur in der klinischen Anwendung, sondern auch in der Grundlagenforschung könnten diese Zellen nützlich sein, da sie aufgrund ihres Ursprungsgewebes vermutlich einen recht primitiven Zelltyp darstellen. Hierfür müsste jedoch zunächst die Klärung der genauen Herkunft sowie die Zuordnung der WJC zu einem definierten Zelltyp erfolgen. 173
Genexpressionsanalysen könnten Aufschluss darüber geben, sowohl anhand der gefundenen, möglicherweise zelltypspezifischen Expressionsmuster als auch im Vergleich mit der Genexpression in den als Ursprung in Frage kommenden Geweben der Nabelschnur. 174
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Humane Primärzellen als Feederzell
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Forschungszentrum Jülich GmbH Inst
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„Siehst du, Momo“, sagte Beppo
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10 3.4 Analytische Methoden........
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1 Zusammenfassung/Abstract Zusammen
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differenzieren. Die Untersuchungen
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Bei der weiteren Entwicklung des Em
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Endoderm, Mesoderm), häufig sogar
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2.4 Hämatopoetische Stammzellen (H
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(CFU-M), Vorläufer von Granulozyte
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Definition: Bei den im Rahmen der v
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Knochenmarkaspiration sind dazu erf
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NOD/SCID-Mäuse zu repopulieren (Oh
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dabei die notwendigen Zytokine für
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Zeichen von Seneszenz und hatten le
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vor allem, dass auch aus Blut MSC g
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zusätzlich weitere Zytokine produz
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Zellkulturplatten aus. Die aus dies
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vorliegenden Arbeit untersuchten Au
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Verfügung stehen müssen, der aufg
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2.9 Problemstellung und Zielsetzung
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selben Spender gewonnen werden kann
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3.1 Allgemeines 3 Material und Meth
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Zytokine Für die Kultur von HSC wu
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(üblicherweise 50 µL) und die res
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Am Tag vor der Aussaat der HSC wurd
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Für die Gewinnung der MNC aus dem
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Mesenchymale Stammzellen (MSC) aus
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Die Vene wurde nun abwechselnd von
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IL-3 und SCF produzieren (Sl/Sl mod
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Die Viabilität der Zellen wurde er
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Laktat Der Laktatgehalt in den Prob
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3.4.5 Funktionelle Charakterisierun
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Am folgenden Tag (d. 0 oder d. 7 de
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WJC Koloniebildende, fibroblastähn
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Zellen abgenommen, die Vertiefungen
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4 Ergebnisse 4.1 Verfügbarkeit der
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Versuchen konnte trotz langer Inkub
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können bereits aus wenig Knochenma
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ausreichendes Wachstum von HUVEC er
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und konnte von einer einzelnen Pers
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• "endothel-ähnlichen Zellen" (=
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Anteil passagierter Vertiefungen [%
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akkumulierte Zellzahl [-] 6x10 6 5x
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fibroblastähnliche Morphologie. WJ
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Abbildung E-13: Expression von CD45
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wiesen für die Oberflächenantigen
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Abbildung E-17: Oberflächenmarkerp
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nachweisen. Im Zellzahlverhältnis
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Im Kulturüberstand der Zellen wurd
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Zellen betrugen 5x10 3 und 1x10 4 Z
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auftretende Unterschiede in der Exp
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A 30 Versuch1 B 4,0 25 Versuch2 3,5
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Expansion CFC [-] 70 60 50 40 30 20
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CAFC-Expansion [-] 60 55 50 45 40 3
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5 Diskussion Obwohl Nabelschnurblut
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die für Präparation und Kultur de
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fibroblastförmige Zellen isolieren
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Seite 134 und 135: auch denkbar, um noch höhere Zellz
Seite 136 und 137: MSC handelt und nicht nur Morpholog
Seite 138 und 139: Feederzellen evaluiert, u.a. um Hin
Seite 140 und 141: Oberflächenmarker für hämatopoet
Seite 142 und 143: Trophoblastzellen steht (Weetman A.
Seite 144 und 145: vergleichbar hoch. SMC dagegen expr
Seite 146 und 147: Phänotyp von MSC, WJC und SMC bez
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Seite 150 und 151: Fazit Alle untersuchten Feederzelle
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