View/Open - JUWEL - Forschungszentrum Jülich

Laktat
Der Laktatgehalt in den Proben wurde mit einem Laktat-Analysator bestimmt. Das an der
Membran dieses Gerätes immobilisierte Enzym Laktatoxidase setzt das in den Proben
enthaltene Laktat zu Pyruvat und H2O2 um.
Glutamin und Glutamat
L-Glutamin und L-Glutamat wurden simultan im Glutamin-/Glutamat-Analysator bestimmt.
Dieses arbeitet mit zwei Sensoren mit jeweils einer Membran. Einer der Sensoren bestimmt
den L-Glutamatgehalt der Probe, indem das L-Glutamat durch die an der Membran
immobilisierte Glutamatoxidase zu α-Ketoglutarat, H2O2 und NH3 umgesetzt wird. Das L-
Glutamin wird mittels zweier an der Membran immobilisierter Enzyme zunächst zu L-
Glutamat und NH3 (entsprechendes Enzym: Glutaminase) und anschließend das L-Glutamat
zu α-Ketoglutarat, H2O2 und NH3 umgesetzt. Da das bereits zuvor in der Probe vorhandene,
freie L-Glutamat bei der zweiten Reaktion dieser Messung mitbestimmt wird, wird der von
der Glutamatsonde bestimmte Wert (nur freies L-Glutamat) von dem Wert der
Glutaminsonde (freies L-Glutamat + durch die erste Enzymreaktion aus L-Glutamin
entstandenes L-Glutamat) abgezogen, um den reinen L-Glutamin-Wert zu erhalten.
3.4.4 FACS-basierte Methoden
Alle Messungen von mit fluoreszenzmarkierten Antikörpern angefärbten Antigenen in Zellen
oder auf der Zelloberfläche wurden in einem FACSCalibur durchgeführt. Als Hüllstrom-
Flüssigkeit wurde FACSFlow oder PBS verwendet. Die Daten wurden mit dem Programm
CellQuest aufgenommen und ausgewertet.
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