Jahresbericht 2003 - Leibniz Institute for Age Research

Arbeitsgruppe Große
was u.a. zur Anreicherung zytoplasmatischer- und kernlokalisierter Proteine führte. Ferner
wird versucht, p53 nach unterschiedlichen Modifizierungszuständen, speziell hinsichtlich der
Phosphorylierungen, zu fraktionieren, da dies einen Einfluss auf die einzugehenden Wechselwirkungen
haben sollte.
Der Einsatz von Zelllinien, die unterschiedliche Varianten und Mengen an p53 exprimieren,
sollen die Wechselwirkungsuntersuchungen komplettieren.
2.2. Fibrinolyse und Blutgerinnung
Mitarbeiter: B. Schlott, A. Willitzer
Finanzierung: DFG-Mittel
Kooperationen: E. Glusa (FSU), O. Ohlenschläger, NMR-Spektroskopie (IMB)
Im Rahmen zweier DFG-Projekte wurde an Fusionsproteinen gearbeitet, die aus Staphylokinase,
einem Plasminogenaktivator, und Dipetalin, einem 2-Domänen-Kazal-Typ Thrombininhibitor,
bestehen. Beide Projekte wurden in Kooperation mit der Arbeitsgruppe Görlach
(NMR-Spektroskopie/Molekulare Biophysik) und dem Zentrum für Angiologie und Experimentelle
Hämostaseologie der FSU bearbeitet. Schwerpunkte sind Struktur-Funktions-Studien am
Dipetalin und die Erhebung entsprechender gerinnungspharmakologischer Daten.
Das Projekt mit Schwerpunkt Proteinstrukturen lief in 2003 aus. Das biochemischgerinnungsphysiologische
Projekt wird im Juni 2004 beendet. Neue Daten zur Struktur der
Domäne II sowie des gesamten Zweidomänenmoleküls des Dipetalins wurden vorgelegt (s.
Bericht der Arbeitsgruppe Görlach). Daraus abgeleitet wurden in 2003 mehrere Proteinmutanten
erzeugt, die speziell im Peptidlinker zwischen Domäne 1 und Domäne 2 Veränderungen
aufweisen. Dadurch sollte die Flexibilität des Gesamtmoleküls bzw. der molekulare
Abstand zwischen beiden Domänen gezielt verändert werden. Wir hofften damit, den bisher
unklaren funktionellen Eintrag dieser Domäne bei der Hemmung des Thrombins und eventuell
anderer Proteasen, sowie unterschiedlicher Phasen der Blutgerinnung zu klären. Entsprechende
struktur- und biochemisch-funktionelle Experimente wurden in 2003 begonnen
und werden bis Juni 2004 fortgesetzt.
2.3. Proteinmuster des Herzmuskels bei Patienten mit dilatativer Kardiomyopathie
(DCM)
Mitarbeiter: B. Schlott, A. Willitzer , A. Schneider, C. Hartung
Finanzierung: Haushalt-IMB
Kooperationen: Klinikum der FSU
DCM-Patienten zeigen Symptome einer gestörten systolischen Funktion des Herzens. Das
Herz ist signifikant vergrößert, der Querschnitt des Herzmuskels ist dagegen deutlich verringert,
was die Reduktion der Pumpfunktion zur Folge hat. Aufgrund der unweigerlich eintretenden
therapierefraktären Herzinsuffizienz ist die Prognose sehr schlecht.
Quantitative und qualitative Veränderungen des Proteinmusters des Herzmuskels wurden
durch vergleichende 2D-Elektrophoresen (Klinik f. Innere Medizin) und nachfolgende Proteinanalytik
(Arbeitsgruppe Große) untersucht. Dabei stellte sich eine Vielzahl von Veränderungen
im Proteinmuster von DCM-Patienten im Vergleich zu gesunden Probanden heraus.
Allerdings waren auch deutliche individuelle Schwankungen von Patient zu Patient festzustellen.
Vielleicht ist dies den unterschiedlichen pathogenetischen Ursprüngen und den
unterschiedlichen klinischen Verläufen bei den DCM-Patienten geschuldet. Aber auch in der
Gruppe der klinisch Gesunden waren signifikante Schwankungen der Proteinexpression im
Sinne qualitativer und quantitativer Veränderungen des Proteinmusters sichtbar. Auf Grund
der doch limitierten Anzahl von Patientengewebsproben (noch schwieriger gestaltete sich die
Bereitstellung „normaler“ Herzgewebsproben) war es bisher noch nicht möglich, die zur
statistischen Absicherung der Ergebnisse notwendige Probenzahl zu beschaffen. Aus diesen
Gründen wurde der globale Ansatz verlassen. Wir konzentrierten uns auf einige kontraktile
Proteine, die speziell bei DCM-Patienten (entsprechend ihrer charakteristischen Lokalisation
auf den 2D-Gelen) modifiziert sein müssen. Die Natur dieser Modifikationen und die
Korrelationen mit dem Krankheitsverlauf werden gegenwärtig untersucht.
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