„Einfluss der elektrischen Hochfrequenzstimulation des Nucleus ...

Methoden 50
2.6 Hochdruck-Flüssigkeits-Chromatographie (HPLC)
2.6.1 Messprinzip
Unter dem Begriff der Chromatographie versteht man die Auftrennung eines
Substanzgemisches zwischen zwei Phasen in dessen Einzelkomponenten.
Ein Verfahren dieser Stofftrennung ist die Hochdruckflüssigchromatographie
(kurz HPLC: High Performance Liquid Chromatography), die sich aus einer
mobilen Phase und einer stationären Phase zusammensetzt. Eine Form der
Phasentrennung der HPLC, die auch in dieser Arbeit verwendet wurde, ist
die Reversed-Phase-Chromatographie.
Die stationäre Phase wird hergestellt, indem man Silane, welche mit
langkettigen Kohlenwasserstoffen substituiert wurden (hier Octadecylsilan,
C18), mit Silicagel reagieren lässt. Dabei wird die polare Oberfläche der
Silicagel-Partikel mit einer unpolaren Schicht aus Alkanen überzogen, also
die Polarität umgekehrt (engl.: "reversed"). Die mobile Phase wird dargestellt
durch eine polare Lösung, den sogenannten Eluenten. Da wir in dieser Arbeit
verschiedene NTM-Systeme betrachteten, wurden zwei verschiedene
Eluenten verwendet. Für die NTM Dopamin, DOPAC, HVA, Serotonin und
HIAA wurde der Eluent 4 genutzt, während für die Analyse von GABA und
Glutamat der Eluent 5 verwendet wurde. Die genaue Zusammensetzung der
Eluenten ist dem Anhang/Material- und Geräteverzeichnis zu entnehmen.
Die mobile Phase trägt während des Trennvorganges die Probe, die unter
hohem Druck durch die stationäre Phase transportiert und in ihre
Einzelkomponenten aufgetrennt wird. Die verschiedenen Komponenten der
Probe gelangen an die Säule und je nach Affinität verweilen sie für
unterschiedliche Zeiten an der stationären Phase. Dabei kommt es zu
Wechselwirkungen zwischen den Bestandteilen der Probe und der Säule, die
je nach Polarität der Komponente über einen kurzen oder langen Zeitraum
bestehen bleiben. Während Verbindungen mit polaren funktionellen Gruppen
(zum Beispiel Hydroxygruppe) schnell von der stationären Phase getrennt
werden, verweilen stark hydrophobe Moleküle länger an der Säule. Die
Probe wird in ihre einzelnen Bestandteile aufgetrennt.