Abstracts - DGPRÄC

39. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft der Plastischen, Rekonstruktiven und Ästhetischen Chirurgen
13. Jahrestagung der Vereinigung der Deutschen Ästhetisch-Plastischen Chirurgen
immunhistochemischen Färbungen bestätigten die Resultate der qRT-
PCR.
Bei der Analyse der Microarrays konnten zwei Gruppen von Expressionsprofilen
aufgest ellt werden, welche mit dem Tumor- und Kontrollgewebe
korrelieren. Die weitere Analyse wird genaueren Aufschluss
über die beteiligten Pathways geben.
Diskussion: Im Rahmen dieser Studie konnten wir auf RNA- und Proteinebene
zeigen, dass die humanen Effektormoleküle des angeborenen
Immunsystems bei malignen Tumoren im Vergleich zum Kontrollgewebe
signifikant überexprimiert werden. Diese Immunantwort der malignen
Tumoren ist Gegenstand weiterer Untersuchungen, um einen besseren
Einblick in die mulitfaktorielle Tumorgenese dieser Tumorentität zu
erhalten und so langfristig Parameter bzw. Marker für die Therapie, Prognose
sowie Rekonstruktion zu etablieren.
P29 � Neovaskularisation im Wundbett – Eine Studie des
Genexpressionsprofils in tierexperimentellen Hautwunden.
Demir E 1 , Sierra Honigmann RM 2 , Pallua N 1
1) Klinik für Plastische Chirurgie, Hand- und Verbrennungschirurgie, Universitätsklinikum RWTH Aachen,
Aachen, 2) Plastic and Reconstructive Surgery, Cedars-Sinai Medical Center, Division of Plastic and
Reconstructive Surgery University of Southern California, Los Angeles, CA, USA
Diese Arbeit beschäftigt sich mit den zellulären und molekularen Vorgängen
der Angiogenese und Neovaskularisation, welche in der ersten
Wundheilungsphase eingeleitet wird und im wesentlichen in der Proliferationsphase
abläuft. Die Neovaskularisation im Wundbett ermöglicht
die essentielle Versorgung des Gewebedefekts mit Sauerstoff, Nährstoffen,
löslichen Mediatoren und Leukozyten.
Die Studienziele wurden wie folgt definiert: Die Genexpression angiogenetischer
Modulatoren und Gefäßmarker der physiologischen Wundheilung
im Versuchstiermodell mittels quantitativer real-time RT- PCR Analysen
sollten erfasst werden. Eine mögliche Modulation des Genexpressionsprofils
in der normalen Wundheilung sollte mit dem angiogenetischund
wundheilungsfördernd wirkenden Zytokin Leptin demonstriert
werden.
Methodik: Das Wundmodell bestand aus paramedianen Vollhaut-Exzisionsbiopsien
(3mm), am Rücken von C57/6J Wildtyp Mäu sen. Zur Untersuchung
der Angiogenese im Wundgewebe, sowie zur Erstellung des physiologischen
Genexpressionsprofils unbehandelter Wunden, wurde die
mRNA-Expression verschiedener die Angiogenese modulierender Zytokine
und ihrer Rezeptoren bestimmt. Es handelte sich im einzelnen um
VEGF, Angiopoetin 1 und 2, Thrombospondine und Leptin. Der Grad
der Gewebevaskularität wurde über die Expression vaskulärer Marker
wie Endothelial Nitric Oxide Synthase (eNOS), Endoglin und CD-31
bewertet. Im zweiten Studienteil wurden die Exzisionsbiopsien jeweils
einmalig mit 10g Leptin und als Negativkontrolle mit Kochsalzlösung
topisch behandelt. Der Endzeitpunkt wurde mit 24 h und 72 h festgelegt.
Alle Wunden wurden komplett mit einer Stanzbiopsie (6 mm) entnommen
und der sofortigen RNA-Extraktion in zwei Schritten mit Trizol
zugeführt. Die quantitative real-time RT-PCR wurde mit Taqman-Gensonden
und Primern auf einem iCycler (Fa. Biorad) durchgeführt.
Ergebnisse: Das Genexpressionsprofil löslicher Mediatoren (VEGF-A, Ang-
1, Ang-2, TGF-β, FGF-2) und zugehörigen Rezeptoren (VEGFR1/2,FLT-
4, Tie-1/2) während der Wundheilung wurde bei 24 h und 72 h alten
Wunden im Vergleich zur gesunden Haut mittels qRT-PCR ermittelt. Die
löslichen Mediatoren der Angiogenese sowie ihre zugehörigen Rezeptoren
zeigten in den ersten 24 h der Wundheilung einen starken Anstieg
in der Genexpression und sind nach 72 h rückläufig. Das Expressionsmuster
der Vaskularitätsmarker (CD31, eNOS, Endoglin, E-Selectin)
zeigte vergleichbare Veränderungen, als Zeichen starker angiogenetischer
Aktivität in den ersten 24 h des Heilungsprozesses im Wundge-
Plastische Chirurgie 8 (Suppl. 1): 71 (2008)
webe. Transkriptionsfaktoren (HOX D3, HIF-1-alpha) induzieren die
Expression angiogenetischer Mediatoren, das Expressionsmuster in 24 h
und 72 h alten Wunden.
Eine Modulation des gesamten Genexpressionsprofils ist bereits durch
eine einmalige topische Stimulation mit z.B. Leptin möglich die Genexpressionsmuster
der löslichen Angiogenese-Mediatoren und ihrer Rezeptoren
sowie von Vaskularitätsmarkern zeigen einen signifikanten
Anstieg in ihrer Aktivität.
Schlußfolgerung: Die Expression angiogenetisch wirksamer Modulatoren,
deren Rezeptoren, Signalmoleküle und Transkriptionsfaktoren erfolgt
überwiegend in den ersten 24 h der Wundheilung. Angiogenetisch wirksame
Modulationen der Wundheilung auf molekularer Ebene könnten in
dieser Frühphase folglich sinnvoll sein. Die einmalige topische Applikation
von 10 Mikrogramm Leptin auf tierexperimentelle Wunden vermag
das Genexpressionsprofil angiogenetischer Moleküle und deren Rezeptoren
um ein vielfaches zu steigern. Diese Resultate demonstrieren die
Anwendung der quantitativen real-time PCR zur Analyse der Genexpression
im Wundbett tierexperimenteller Wunden. Die hieraus gewonnen
Ergebnisse tragen zum Verständnis des komplexen Wundheilungsgeschehens
bei. Weitere Studien mit neuen Erkenntnissen über die zellulären
und molekularen Zusammenhänge der Wundheilung könnten in
nicht zu ferner Zukunft potentielle Möglichkeiten der gezielten pharmakologischen
Wundheilungsmodulation erlauben.
P30 � Anwendung der NMR-Mouse® Technologie zu
objektiven Evaluierung von Narbengewebe
Abstracts
Demir, E 1 , Schröder, M 1 , Oppel, P 2 , Bluemich, B 2 , Pallua, N 1
1) Klinik für Plastische Chirurgie, Hand- und Verbrennungschirurgie Aachen, Universitätsklinikum RWTH
Aachen, 2) Institut für Makromolekulare Chemie, RWTH Aachen
Die Objektivierung der Wundheilung und der Narbentherapie war bisher
problematisch es existieren bis dato keine geeigneten objektiven Verfahren.
Die derzeit eingesetzten Hilfsmittel wie z.B. Cutometer, Cholorimeter
oder Ultraschall Dermascan zeigten sich als insuffizient.
Wir stellen den Einsatz der kompakten flexiblen NMR Mouse®-Technologie
vor. Mit dieser neuen Technik ist es möglich, durch eine exakte anatomische
Korrelation der Messungen mit histologischen Gewebeschnitten
Rückschlüsse auf den Reifungsprozess und die Tiefenausdehnung
von Narben im Vergleich zur gesunden Haut zu erzielen.
Material & Methoden: Die NMR Mouse (nuclear resonance mobile universal
surface explorer) besteht aus einer Anordung von zwei permanent
Magneten mit antiparalleler Polarisation (B0), welches zwischen sich
eine Spule besitzt und ein inhomogenes Feld pulst (B1). Der limitierte
sensitive Meßbereich ergibt sich aus beiden Feldern, wenn B0 orthogonal
zu B1 steht und – die Larmor Frequenz entsteht.
Die ermittelten Parameter wie Spinndichte und mittlere relative Relaxationszeit
T2 ermögl ichen Aussagen über Beschaffenheit der Gewebestrukturen
wie z.B. Dichte, Härte, Wassergehalt und Gewebetiefe. Die
maximale Auflösung kann hierbei bis zu 4 µm betragen.
Bei 30 Probanden wurden Messungen an der Handinnenfläche und am
Unterarm zur Abbildung unterschiedlicher Hautarten durchgeführt.
Patienten mit Verbrennungsnarben unterschiedlicher Reifegrade im Vergleich
zu deren gesunden Gegenseite wurden ebenfalls gemessen. Repräsentative
Haut- und Narbenproben, welche während Routine Eingriffen
in der Plastischen Chirurgie gewonnen wurden bildeten die Kontroll- und
Referenzproben. Eine Korrelation der NMR-Messungen mit den histologischen
Schnitten der einzelnen Proben als mikroskopische Querschnitte
durch die Haut bzw. durch das Narbengewebe wurde durchgeführt.
Ergebnisse: Die NMR Mouse biete durch die reliable Datengewinnung eine
optimale Evaluierungsmöglichkeit von Haut und Narbengewebe bis zu
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