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<strong>Abstracts</strong> Proteine, die bisher ausschließlich in diabetischen Wunden nachzuweisen waren. Diese Datensätze werden kontinuierlich durch die Analyse weiterer Proben erweitert. Schlussfolgerung: Die Proteomanalyse mittels MudPIT bietet eine ideale Möglichkeit, die Unterschiede im Proteinprofil von akuten und chronischen Wunden darzustellen. Dadurch erhalten wir tiefere Einblicke in die Pathophysiologie der verschiedenen Wunden, können die gefundenen Unterschiede genauer untersuchen und eröffnen so die Möglichkeit neuer Therapiestrategien. Zudem lässt sich durch die weitere Optimierung der Präfraktionierung der Wundflüssigkeiten die Identifikationsrate noch erhöhen. P54 � Mechanismus der pH-abhängigen, enzym-unabhängigen Stickstoffmonoxid-Bildung in der menschlichen Haut Suschek CV, Opländer Ch, Pallua N Klinik für Plastische Chirurgie, Hand- und Verbrennungschirurgie, Universitätsklinikum der RWTH-Aachen In der menschlichen Haut stellt das Stickstoffmonoxidradikal (NO) einen essenziellen Steuerungsfaktor der Wundheilung dar. NO ist wesentlich an der Regulation der Teilung, Differen-zierung und Migration von Zellen, der Kollagensynthese, der Angiogenese sowie der Entzün- dungsmodulation beteiligt. NO kann von allen Zelltypen der menschlichen Haut mit Hilfe von NO-Synthasen (NOS) aus L-Arginin generiert werden. Eine unzureichende NO-Produktion im Wundgeschehen, z.B. aufgrund eines Mangels des NOS-Substrates L-Arginin, ist mit einer gestörten Wundheilung assoziiert. NO kann aber auch enzymunabhängig, z.B. durch den pH-abhängigen Zerfall des stabilen NO-Abbauproduktes Nitrit gebildet werden, welches somit einen potentiellen NO-Speicher in der menschlichen Haut darstellen könnte. Das Ziel der hier vorgestellten Studie war es, die Konzentration der NO-freisetzenden Stickoxidderivate in der menschlichen Haut zu bestimmen und da insbesondere in ischämischen Bereichen des Wundgeschehens der Haut mit starken pH-Erniedrigungen zu rechnen ist, haben wir die Kinetiken sowie die chemischen Besonderheiten der pH-abhängigen NO-Generierung aus Nitrit charakterisiert. Material und Methoden: Zur Bestimmung der kutanen Konzentration potentiell NO-generierender Stickoxidderivate wurde die Chemolumineszenzdetektions (CLD)-Technik verwendet. Die Mechanismen und die Kinetiken des pH-abhängigen Zerfalls von Nitrit haben wir ebenfalls mit Hilfe der CLD-Technik charakterisiert. Unter der Nutzung der konfokalen Laser-Scanning-Mikroskopie haben wir zudem den pH-induzierten, intrazellularen Zerfall von Nitrit in menschlichen Hautke-ratinozyten sowie Hautfibroblasten analysiert und den Einfluss dieses Zerfalls mit dem Wachstumsimpuls der Zellen korreliert. Ergebnisse: In der menschlichen Haut können Nitritkonzentrationen von bis zu 15 µM detektiert werden. Mit diesen Nitritmengen kann bereits ab einem pH von 6,5 signifikant NO in Konzentrationen von 2-3 ppb generiert werden. Beim wundenrelevanten pH 4,5 werden bis zu 50 ppb NO generiert. Diese spontane NO-Freisetzung wird in Anwesenheit der Antioxidantien Askorbinsäure bzw. des Vitamin E-Derivats Trolo x auf das 4-5-Fache gesteigert. Im Gegensatz dazu bewirkt reduziertes Glutathion, ein im Hautgewebe in hohen Konzentrationen synthetisiertes Antioxidants, eine >70 %ige Reduktion der NO-Generierung. In Zellkulturen mit humanen Hautzellen konnten wir zudem erstmals beweisen, dass das intrazellulär vorhandene Nitrit tatsächlich ein Derivat des enzymatisch von den Zellen produzierten NO darstellt, und dass in Zellkulturen mit humanen Hautzellen eine Reduktion der intrazellulären Nitritkonzentrationen zu einem signifikant verlangsamten Zellwachstum sowie zu einer erhöhten Empfindlichkeit gegenüber dem toxischen 39. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft der Plastischen, Rekonstruktiven und Ästhetischen Chirurgen 13. Jahrestagung der Vereinigung der Deutschen Ästhetisch-Plastischen Chirurgen Einfluss von entzündungsrelevanten Noxen wie z.B. Wasserstoffper oxid (H2O2) führt. Schlussfolgerung: Unsere Daten zeigen deutlich, dass die Haut den größten Speicher für potentiell NO-freisetzende Substanzen darstellt. Unsere Ergebnisse machen zudem deutlich, dass durch die Variation bzw. Kontrolle des pH sowie des Redoxstatus der Wunde die Höhe und somit die biologische Wirkung des nicht-enzymatisch gebildeten NO beeinflusst werden kann. Die hier vorgestellte Arbeit liefert somit erstmals Hinweise darauf, dass das Wissen über den Nitritgehalt sowie den pH- und Redox status eines Gewebes prognostische Parameter über sein Wundheilungspotential darstellen könnte. P55 � Integration endothelialer Progenitorzellen in Neo-Kapillaren nach subkutaner Implantation in einer Fibrinmatrix Bleiziffer O, Hammon M, Arkudas A, Rath S, Pryymachuk G, Naschberge E, Stürzl M, Horch RE, Ulrich Kneser U Universitätsklinikum Erlangen, Klinik für Plastische und Handchirurgie Ziel der Studie: Die Vaskularisierung bioartifizieller Matrizes ist eine wichtige Voraussetzung für deren klinischen Einsatz zur Schaffung neuer Gewebe und Organe. T17b murine endotheliale Progenitorzellen (EPC, Hatzopoulos, 1998) zeigen nach systemischer Applikation homing in ischämische Regionen wo sie differenzieren und zur Bildung neuer Blutgefäße beitragen. Das Ziel der vorliegenden Studie war es, das Verhalten von in einer Fibrin Matrix suspendierten EPC in vitro und deren Rolle in der Angiogenese in einer subkutan implatierten Kammer in vivo zu untersuchen. Material und Methoden: 1 x 105 EPC wurden in einer 3-D Fibrinmatrix suspendiert. Nach 3 und 8 Tagen Inkubation in vitro erfolgten anhand histologischer Schnitte morphologische Untersuchungen des Wachstumsmusters sowie immunhistochemischen Analysen hinsichtlich Proliferation (Ki-67) und Differenzierung (von Willebrand Faktor = vWF). In der 2- D Zellkultur wurde der Einfluß einer 72-stündigen Hypoxie (1 % O 2) auf die Differenzierung der EPC mittels vWF Immunhistochemie untersucht. Für die in vivo Studie wurden 5 x 106 EPC vor der Suspension in der Fibrinmatrix mit dem roten Fluoreszenzfarbstoff DiI markiert und anschließend in einer subkutanen Trennkamme r in Ratten implantiert. Um die Wechselwirkung zwischen EPC und Gefäßsystem des Empfängertiers analysieren zu können, erfolgte vor Explantation der Konstrukte die in vivo Markierung des Gefäßsystems mittels i.v. Injektion von grün fluoreszierendem BS-1 Lectin. Zur weiteren Differenzierung erfolgte anschließend die Färbung der histologischen Schnitte mit dem blau fluoreszierenden Zellkernmarker DAPI. Ergebnisse: T17b EPC zeigten in der Fibrinmatrix signifikantes Proliferationspotential mit progredienter Formation von Zellclustern und lumenartigen Strukturen und immunhistochemischem Nachweis Ki-67 positiver Zellen. Die Differenzierungsleistung der Zellen wurde durch Detektion von vWF in Fibrin-suspendierten EPC mittels PCR nachgewiesen. Hypoxie erwies sich als potenter Induktor der Zelldifferenzierung, die in der Zellkultur anhand zahlreicher vWF-positiver EPC gezeigt werden konnte, während sich unter Normoxie keine vWF Expression durch die EPC nachweisen ließ. Nach Transplantation DiI fluoreszenzmarkierter T17b EPC konnten zu jedem Beobachtungszeitpunkt EPC detektiert werden, wobei nach initialer präferienteller Lokalisation im Clot an den Tagen 3 und 7 am 14. Tag die Mehrzahl der Zellen im Granulationsgewebe lokalisert waren. Hier konnte anhand der unterschiedlichen Fluoreszenzmarkierungen für EPC und der Blutgefäße der Empfängertiere gezeigt werden, daß EPC in neu entstandene Kapillaren eingebaut werden und so unmittelbar an der Neo- 82 Plastische Chirurgie 8 (Suppl. 1): 82 (2008)
39. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft der Plastischen, Rekonstruktiven und Ästhetischen Chirurgen 13. Jahrestagung der Vereinigung der Deutschen Ästhetisch-Plastischen Chirurgen angiogenese beteiligt sind. Auch in den intermuskulären Septen konnten EPC nachgewiesen und damit der Nachweis der Migration erbracht werden. Der Anschluß an das Blutgefäßsystem und die daraus resultierende systemische Verteilung konnte durch Detektion der EPC in der Milz der Empfängertiere nachgewiesen werden. Schlussfolgerungen: Die vorliegende Studie zeigt, daß xenogen in einer Fibrinmatrix transplantierte EPC überleben, aus der Fibrinmatrix ins Granulationsgewebe migrieren, dort in neu entstehende Kapillaren integrieren und damit unmittelbar an der Neoangiogenese beteiligt sind. T17b EPCs könnten die Neo-Angiogenese in bioartifiziellen Konstrukten stimulieren, da sie bevorzugt homing in Areale mit aktiver Neo- Angiogenese zeigen sowie unmittelbar in neu geformte Blutgefäße integriert werden. P56 � Validierung eines Stereo Camera Systems für die 3D Bilddarstellung der Brust Henseler H 1 , Ray A 1 , Khambay B 2 , Xiang Y 3 , Siebert P 4 , Bowman A 5 , Ayoub A 2 1 Abteilung für Plastische Chirurgie, Canniesburn Unit, Glasgow Royal Infirmary, UK 2 Zahnklinik und Schule, Universität von Glasgow, UK 3 Abteilung für Computerwissenschaften, Universität von Aberdeen 4 Abteilung für Computerwissenschaften, Universität von Glasgow 5 Abteilung für Statistik, Universität von Glasgow Hintergrund: Aufbauend auf Er fahrungen mit 3D Bilddarstellung aus der Zahnheilkunde sowie Mund, Kiefer und Gesichtschirurgie fand dieses Verfahren seit kurzer Zeit ebenso in der Brust Chirurgie Anwendung. Für die 3D Bilddarstellung stehen verschiedene Methoden zur Verfügung. In der vorliegenden Arbeit wird die Anwendung eines Stereo Camera Systems unter Einbeziehung mehrerer Cameras vorgestellt. Material und Methode: Das angewendete Stereo Camera System besteht aus 4 Pods mit je zwei Cameras. Die Validierung des Systems wurde untersucht. Hierzu wurde die Technik der Wasserverdrängung angewendet. Objekte von unbekanntem und bekanntem Volumen wurden durch Wasserverdrängung vermessen und die Messergebnisse als Vergleichswerte zu jeden des 3D Bildverfahrens betrachtet. 6 Gips Brust Modelle wurden untersucht. Das Volumen jedes dieser Modelle wurde 10 Mal mit Wasserverdrängung und 10 Mal mit Stereophotogrammetry vermessen. Die Untersuchung mit Wasserverdrängung wurde von zwei Untersuchern durchgeführt. Zwei weitere Gips Modelle, eines mit runder Rückwand und eines in der Form einer perfekten Halbkugel wurden ebenso betrachtet. Die Ergebnisse der Untersuchung mit Wasserverdrängung und 3D Bilddarstellung wurden im Hinblick auf das totale Volumen sowie die Standardabweichung verglichen. Eine Statistische Analyse wurde durchgeführt und zur Validierung angewendet. Das Volumen der Gips Brust Modelle aus der Untersuchung der Wasserverdrängung wurde als Gold Standard zu Grunde gelegt. Weiterhin wurde eine Pilot Studie unter Einbeziehung von 6 Lebend Modellen der Kunsthochschule durchgeführt. Jedes dieser Modelle wurde 6 Mal mit Wasserverdrängung und 6 Mal mit 3D Bilddarstellung hinsichtlich des Brustvolumens gemäß eines standardisierten Protokolls untersucht. Darüber hinaus wurden Messungen des Volumens eines der Gips Brust Modelle sowie eines der Lebend-Modelle durch Kernspinuntersuchung durchgeführt. Im Lebend-Modell wurde einerseits das gesamte Brustvolumen als auch andererseits ein Teil des Brustvolumens unter Ausschluss der Rückwand betrachtet. Ergebnisse: Das Verfahren der Wasserverdrängung war akkurat und reproduzierbar für die Volumenmessung der Gips Brust Modelle. Die Unterschiede in den Ergebnissen durch Wasserverdrängung und 3D Bildverfahren waren geringer als 50 cc in den meisten Fällen und somit von ein- Plastische Chirurgie 8 (Suppl. 1): 83 (2008) geschränkter klinischer Relevanz. Die Unterschiede waren geringer als 5 % in den meisten Fällen. In den Lebend-Modellen waren die Unterschiede zwischen den einzelnen Messungen größer als in den Gips Modellen. Dies war der Fall für die Volumenmessung in der Wiederholung der Wasserverdrängung als auch im Vergleich der Volumenmessung der Wasserverdrängung mit der 3D Bilddarstellung. Daher wurde das Verfahren der Wasserverdrängung als möglicher Gold Standard der Brustvolumen Messung im Lebend Modell abgelehnt. Die Untersuchung mit Hilfe der Kernspinnuntersuchung ergab im Gips Modell akkurate und reproduzierbare Ergebnisse. Im Lebend-Modell zeigten die Ergebnisse gute Reproduzierbarkeit. Eine Aussage zur Genauigkeit der Kernspinuntersuchung im Lebend Modell erschien schwieriger und wurde durch Vergleich der Teil- und Gesamt-Brustvolumenmessung angestrebt. Schlussfolgerung: 3D Bilddarstellung ist ein zuverlässiges Verfahren. Eine Validierung ist möglich durch Vergleich der Messergebnisse mit jenen aus der Wasserverdrängung. Diese dient als Goldstandard soweit es die Messung des Volumens von Gips Brust Modellen betrifft. Für die Messung des Brust Volumens der Lebend Modelle sollte die Kernspinnuntersuchung hinzugezogen werden, die hierfür eher die Kriterien des Goldstandards erfüllt. Die Validierung der 3D Bilddarstellun g im Lebend Modell sollte unter Anwendung von Wasserverdrängung und Kernspinnuntersuchung erfolgen. P57 � Co-Kultivierung von verschiedenen Zelltypen auf Spinnenseide Hillmer A, Allmeling Ch, Reimers K, Kuhbier J, Vogt PM, Medizinische Hochschule Hannover, Plastisch Chirurgie <strong>Abstracts</strong> Nach mehr als 400 000 Jahren der Evolution wurden in unserer Arbeitsgruppe die Spinnen als Produzenten eines Biomaterials für das Tissueengineering entdeckt. Die für in vitro Kultivierung von Organen optimale Matrix löst keine Abwehrreaktion nach Transplantation aus, ermöglicht eine Besiedlung mit verschiedenen Zelltypen und ist zudem noch biologisch abbaubar. All diese Eigenschaften hat Spinnenseide und scheint daher eine ideale Matrix im Bereich Tissue-engneering zu sein. Methoden und Material: In unseren Untersuchungen verwenden wir den Major Ampullate Faden der Spinne Nephila clavipes. Dieser Faden wurde auf einem Edelstahlrahmen in Form eines Maschenwerks gewebt und vor Gebrauch autoklaviert. Eine Zellkulturschale, welche mit 0,2 % Pluronic F 127 beschichtet wurde, verhinderte, dass die Zellen an dem Boden adhärierten. Der erste Zelltyp wurde auf dem Spinnenseidegrüst mit einer Maschenweite von 150-300 µm3 ca. 7 Tagen kultiviert. Die Zellen adhärierten bevorzugt in den Ecken, proliferierten und füllten die Zwischenräume aus, bis sie konfluent waren. Nachfolgend wurde zweimal für jeweils 7 Tage der nächste Zelltyp auf dem Konstrukt angesiedelt. Um zwischen den verschiedenen Zelltypen differenzieren zu können, wurden diese mit verschiedenen Fluoreszenzfarbstoffen (CFSE, CTO und Hoechst 3324) vor Besiedlung des Konstrukts markiert. Ergebnisse und Zusammenfassung: Diese Technik erlaubte es uns, verschiedene Zelltypen auf der Spinnenseide anzusiedeln, sie nachfolgend zu identifizieren und durch die geeignete Kombination der Zelltypen ein organotypisches Modell in vitro zu generieren. Im besonderen Interesse unserer Untersuchungen stand die Kultivierung von Fibroblasten auf dem Spinnenseidefaden. Dieser Zelltyp war in der Lage, auch größere Lücken des Maschenwerks auszufüllen und somit das Grundgerüst für weitere Zelllagen zu bilden. Die Zellen konnten über einem Zeitraum von mehreren Wochen auf dem Spinnenseidefaden kultiviert werden, ohne dass sie sich von dem Maschenwerk ablösten. 83
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Postvertriebsstück D57442 Gebühr
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Seite 131 und 132: Harmonic SYNERGY TM DIE INNOVATION
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