Las tesinas - Universidad de Belgrano

Tesinas Identificación y cuantificación de polifenoles en yerba mate y brebajes
reaccionan con el FCR no parecen pasar a integrar parte del cromóforo azul. Tampoco parece que los
productos azules generados varíen de acuerdo al sustrato (tipo de fenol). Esta conclusión se basa en la
similitud de los espectros del producto (azul) de la reacción que se obtiene con cualquier sustrato. Los
ensayos de recuperación realizados con ácido gálico en vino demuestran una recuperación del 100% y
la absorbancia producida por mezclas de fenoles naturales de distintos tipos es equivalente a la suma de
sus contribuciones individuales. (Singleton et al., 1999).
5.3- Materiales y Métodos.
5.3.1- Muestras vegetales:
l Hojas secas de Ilex paraguariensis var. paraguariensis. Clon 8/74. N° de planta 10. Fecha de recolección
20/09/2010. (Origen: Misiones), provistas por Ing. Agr. Sergio Prat Kriun. Grupo Yerba mate
y Té. INTA-Cerro Azul. La muestra de herbario de la droga empleada se conserva en el INTA Cerro
Azul (Misiones)
l Yerba mate con palo comercial.
l Yerba mate despalada comercial.
5.3.2- Equipos y materiales utilizados:
l Espectrofotómetro UV-VISIBLE, Marca Shimadzu, modelo UV-1700 Pharmaspec.
l Balanza analítica, Marca Shimadzu, modelo AUW 220D.
l Rotavapor, Marca Buchi, modelo R-3000.
l Acido Gálico marca Sigma Aldrich pureza ≥99%(HPLC). Catálogo: G7384
l Metanol, calidad HPLC (Baker)
l Reactivo de Folin-Ciocalteau reagent, Sigma, catálogo: 47641.
l Carbonato de sodio p.a (Anedra)
l Agua MilliQ (filtro Millipore de 0,45 mm)
5.3.3- Método: Cuantificación de polifenoles totales.
Para realizar la cuantificación de compuestos fenólicos en yerba mate y brebajes por el método de
Folin-Ciocalteau se procedió a realizar en primer lugar una curva de calibración utilizando un espectrofotómetro
que mide la absorbancia de una muestra a la longitud de onda determinada para el complejo
en función de concentración de la misma. Una vez determinados los valores de absorbancia para cada
concentración de ácido gálico (sustancia de referencia para realizar la curva de calibrado) se graficó la
concentración en función de la absorbancia a 740 nm para determinar el rango de concentraciones en
el cual se obtenía una linealidad aceptable (r2 mayor a 0.99) asegurando así que el método es capaz
de producir resultados proporcionales, directamente o mediante una transformación matemática, a la
concentración del analito en las muestras, dentro de un determinado rango.
5.3.3.1- Curva de calibración de Acido Gálico:
Se preparó una solución estándar de 25 mg / 100 ml de agua de ácido gálico. A partir de esta solución
se prepararon 5 soluciones (concentraciones 0,025; 0,050; 0,075; 0,1; 0,125 mg/ml). Se tomó 0,5 ml de
cada solución preparada anteriormente y se agregaron 2,5 ml del Rvo. de Folin-Ciocalteau 10% en agua
destilada y luego 2 ml de solución de Na 2 CO 3 7,5% en agua destilada. Estas soluciónes se mantuvieron
en la oscuridad durante 2 horas. Se midió la absorbancia de cada muestra en el espectrofotómetro a
740 nm de longitud de onda y se construyó la curva con los datos obtenidos, utilizando como blanco una
muestra de agua tratada de forma similar a las soluciones muestra.
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