Las tesinas - Universidad de Belgrano

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Tesinas Identificación y cuantificación de polifenoles en yerba mate y brebajes l Temperatura del horno: 24C l Volumen de inyección: 20 μl l Programa de elución: 6.3 Preparación de las soluciones: 6.3.1- Fase Móvil: Solución A: Medir exactamente 0,1 ml de ácido fosfórico y colocar en matraz de 100 ml. Llevar a volumen con agua calidad HPLC. Solución B: Medir exactamente 0,1 ml de ácido fosfórico y colocar en un matraz de 100 ml. Llevar a volumen con acetonitrilo calidad HPLC. 6.3.2- Solución testigo: Se prepararon soluciones testigo de Ácido clorogénico, Rutina y Ácido cafeico de una concentración de 0,1mg/ml de cada sustancia de referencia. La solución de ácido cafeico de 0,1 mg/ml se diluyó para obtener una concentración de 0.01 mg/ml. Se tomaron 4 ml, 0,5 ml y 1 ml de cada solución respectivamente y se transfirió a un matraz de 10 ml y se llevó a volumen con agua. Se obtuvo una concentración final aproximada entre 0.05 mg/ml, 0.005 mg/ml y 0,0001 mg/ml respectivamente. 6.3.3- Muestras vegetales y brebajes: 6.3.3.1 Muestras vegetales Los extractos fueron preparados pesando exactamente alrededor de 5 g de cada muestra vegetal (en este caso Ilex paraguariensis, yerba mate con palo y yerba mate sin palo comercial), las cuales fueron sometidas a sonicación con 100 ml de MeOH a temperatura ambiente por 20 minutos. Luego de este período se filtraron los extractos. El marco de las filtraciones fue sometido nuevamente a sonicación con 100 ml de MeOH a temperatura ambiente por otros 20 minutos. Los dos extractos metanólicos obtenidos para cada muestra vegetal se colocaron en un matraz aforado de 250 ml y se llevaron a volumen con el mismo solvente. Se tomó 1ml de cada uno de estos extractos y se colocó en un matraz aforado de 10 ml, y se llevó a volumen con una solución de MeOH: H2O (50:50). 42
Tesinas Identificación y cuantificación de polifenoles en yerba mate y brebajes 6.3.3.2 Preparación de brebajes: Mate cocido: Se pesaron exactamente alrededor de 20 g de yerba mate comercial con palo, y se colocaron en un recipiente que contenía 250 ml de agua a ebullición unos cinco minutos, se coló y se obtuvo un extracto acuoso. Se tomó 1 ml y se colocó en un matraz aforado de 100 ml llevándose a volumen con agua destilada. Mate caliente: Se pesaron exactamente alrededor de 20 g de yerba mate comercial con palo, y se colocaron en un mate, a lo cual se agregó una primera porción de agua de 70 ml a 80°C y luego de unos segundos se accionó la bomba de vacío para retirar el extracto. Esto se repitió hasta un total de seis cebadas a intervalos de tiempo regular con 35ml de agua en cada porción. Se obtuvo un extracto acuoso. Se tomó 1 ml y se colocó en un matraz aforado de 100 ml llevándose a volumen con agua destilada. Preparación de mate tereré: Se pesaron exactamente alrededor de 20 g de yerba mate comercial con palo, y se colocaron en un mate, a lo cual se agregó una primera porción de agua de 70 ml fría a 3°C y luego de unos segundos se accionó la bomba de vacío para retirar el extracto. Esto se repitió hasta un total de seis cebadas a intervalos de tiempo regular con 35ml de agua en cada porción del cual se obtuvo un extracto acuoso. Se tomó 1 ml y se colocó en un matraz aforado de 100 ml llevándose a volumen con agua destilada. 6.4 Procedimiento: Se inyectó la solución testigo por duplicado, registrando el cromatograma a 255 y 325 nm. Se identificaron los picos correspondientes a ácido clorogénico y cafeico a 325 nm, y rutina a 255 nm. Se inyectaron las soluciones muestras cada una por separado por duplicado, registrando el cromatograma a 255 y 325 nm. 6.5 Resultados y discusión: 6.5.1. Tiempos de retención: Tabla 6.1. Los datos obtenidos de los tiempos de retención de los testigos (Ácido clorogénico, Ácido cafeico y Rutina), inyectados en HPLC, están expresados en minutos y coinciden con las muestrasvegetales y brebajes. (Ver cromatogramas en Anexo 3) 43
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