neospora caninum - Ordinevetverona.it

I materiali che è opportuno esaminare di preferenza, quelli dove esami
immunoistochimici hanno rivelato che più spesso è rinvenibile Neospora
caninum, sono il cervello, il cuore, il rene e il fegato.
Timothy, Baszler et al. (1999) ottimizzarono la tecnica di PCR per la ricerca e
amplificazione del gene pNC-5, utilizzando due coppie di primers: Np4-Np7 e
Np6-Np7. Studi preliminari utilizzando sangue e tessuto nervoso bovino
mostrarono che la coppia di primers Np4-Np7, quando usata in una procedura
standard o quando usata prima della coppia di primers Np6-Np7, fornisce
ottimi risultati sui tessuti bovini testati. La coppia di primers Np4-Np7
amplifica un frammento di DNA di 275 bp, mentre la coppia Np6-Np7
amplifica un frammento di 227 bp. La PCR effettuata sfruttando prima la
coppia di primers Np4-Np7 seguita dalla coppia Np6-Np7 aumenta
notevolmente la sensibilità del test.
Per escludere eventuali, ma rari, falsi-negativi, dovuti soprattutto alla scarsa
qualità del DNA da testare (tessuti con spiccati fenomeni di autolisi), si può
ricorrere alla PCR multipla, che utilizza, oltre alle coppie di primers di N.
caninum, una coppia di primers relativa al gene della prolattina bovina (PRL)
espresso appunto dalle cellule di origine bovina. La coppia di primers PRL
HL033-HL035 amplifica un frammento di 156 bp di DNA (Fig. 26).
La sensibilità della PCR è del:
1. 77% per tessuto nervoso fresco (Fig. 24).
2. 100% se effettuata su tessuti fissati in formalina e per quelli allestiti con
paraffina (Fig. 25);
- 68 -