Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento - nº 37 1

crorganismos, remover substânciastóxicas e bioativas, permitir o processamentode grandes volumes de sêmen,além de permitir o controle daconcentração e volume final da suspensãoespermática (GONÇALVES etal., 2002).A composição química dos meios parao cultivo in vitro de embriões foi determinadapela avaliação de suas necessidadesmetabólicas. A maioria dosmeios consiste de soluções salinasacrescidas de um componente macromolecular,podendo ser preparadasem laboratórios próprios, ou adquiridascomercialmente (MATTOS et al,1991).CULTIVOO cultivo de células in vitro (Figura3) requer o uso de substâncias compropriedades especiais como, presençade proteínas, propriedades sulfarctantese ausência de toxinas, para umbom desenvolvimento celular (SOLA-NO & PILAR, 1984).A composição química dos meios parao cultivo in vitro de embriões foi determinadapela avaliação de suas necessidadesmetabólicas. A maioria dosmeios consiste de soluções salinasacrescidas de um componente macromolecular,podendo ser preparadasem laboratórios próprios, ou adquiridascomercialmente (MATTOS etal, 1991).Figura 5: Etapas do processo demicromanipulação para a retirada de biópsiaembrionária por aspiração (GARCIA; UVO,2002)Para facilitar a liberação dos embriõesbiopsiados do fundo da placa de petri,é adicionado a cada microgota contendoembrião biopsiados, 50µl de Sur-factant Fluramic a 0,4% ou 50µl deálcool polivinil a 1% (HASLER et al,2002). Segundo Ardais et al (2005);os embriões geralmente são biopsia-MICROASPIRAÇÃO DO DNA(BIÓPSIA)Para realizar a biópsia de embriõesutiliza-se um micromanipuladorLeitz (Figura 4). Uma placa é acopladae montada em um dos ladosdo micromanipulador. Antes da biopsia,os embriões são individualmentelavados através de três microgotas(100 µl) de proteínalivrePBS em uma placa de petri de 100mm 2 . Os embriões são aderidos aofundo da placa de petri e são visualizadosa uma amplificação de 100vezes e alinhados ao centro. Umapequena porção ideal de 6 a 10 célulasdo blastocisto é removida pelomovimento direto da lâmina (Figura5), geralmente na borda do embrião.Depois que cada embrião ébiopsiado, a lâmina é descartada.Figura 6. Diagrama ilustrando as diferentes etapas durante aamplificação de DNA utilizando a técnica de PCR (OLIVEIRA;HENKES, 2002)32 Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento - nº 37