Promotion Wiebke Winkens Abgabeversion 2 - RWTH

Inhaltsverzeichnis
3.7.1.3 cDNA-Synthese .................................................................................26
3.7.1.4 Kommerzielle cDNA Proben.............................................................27
3.7.2 DNA-Isolierung.........................................................................................27
3.7.2.1 DNA-Isolierung aus Gewebe und Zelllinien .....................................27
3.7.3 Polymerase-Kettenreaktion (PCR)............................................................27
3.7.4 Expressionsanalyse mittels Real-Time-PCR ............................................29
3.7.5 Methylierungs-spezifische PCR................................................................31
3.7.5.1 Bisulfit-Umwandlung von genomischer DNA aus Gewebeproben...31
3.7.5.2 Methylierungs-spezifische PCR (MSP).............................................32
3.7.6 Agarose-Gelelektrophorese zur Auftrennung von Nukleinsäuren............34
3.7.7 Konzentrationsbestimmung der gewonnen Nukleinsäuren.......................34
3.8 Statistische Methoden .....................................................................................34
4. Ergebnisse ...............................................................................................................35
4.1 Semiquantitative Analyse der Frizzled-Expression mittels Real-Time-RT-
PCR in Mammakarzinomen........................................................................................35
4.1.1 Analyse der Frizzled-Expression mittels Real-Time-RT-PCR in normalen
Brustdrüsengewebe .................................................................................................35
4.1.2 Analyse der FZD1, FZD4, FZD6 und FZD10-Expression im 16
Normalgewebe-25 Tumorgewebe-Kollektiv ..........................................................36
4.2 Semiquantitative Analyse der WNT-Expression mittels RT-PCR in
Mammakarzinomen.....................................................................................................40
4.2.1 Etablierung intronüberspannender Primer für die Mitglieder der WNT-
Familie mittels RT-PCR..........................................................................................40
4.2.2 Expressionsanalyse der WNT-Gene in normalem Brustgewebe ..............41
4.2.3 Expressionsanalyse der WNT-Gene in einem Tumor-Normalgewebe-
Kollektiv..................................................................................................................42
4.3 Semiquantitative Analyse der WNT-Expression in Ovarialkarzinomen ........43
4.3.1 Abregulation von WNT2b in Ovarialkarzinomen.....................................44
4.3.2 Kein differentieller Methylierungsstatus von WNT2b im untersuchten
Ovar-Normalgewebe/Tumorgewebe-Kollektiv ......................................................45
4.3.3 Aufregulation von WNT7a in Ovarialkarzinomen ...................................47
5. Diskussion...............................................................................................................50
5.1 Semiquantitative Analyse der Frizzled-Expression mittels Real-Time-RT-
PCR in Mammakarzinomen........................................................................................50
5.2 Semi quantitative Analyse der WNT-Expression mittels RT-PCR in
Mammakarzinomen.....................................................................................................52
5.3 Semiquantitative Analyse der WNT-Expression mittels Real-Time-RT-PCR
in Ovarialkarzinomen..................................................................................................55
5.3.1 WNT2b-Expression im Ovarialkarzinom .................................................56
5.3.2 WNT7a-Expression im Ovarialkarzinom .................................................58
6. Zusammenfassung...................................................................................................60
7. Literaturangaben, alphabetisch ...............................................................................62
II