Promotion Wiebke Winkens Abgabeversion 2 - RWTH

Diskussion
gerade auf Rezeptorebene viele weitere Möglichkeiten der Regulation nach der mRNA-
Ebene. So sind die Frizzled-Rezeptoren als 7-Transmembran-Rezeptoren nur aktiv,
wenn sie sich an der Zellmembran befinden und die benötigten Co-Faktoren zur
Verfügung stehen (Tamai et al., 2000). Der Zelle stehen nach der Transkription
verschiedene weitere Möglichkeiten zu Verfügung die Aktivität von Rezeptoren auf der
Zelloberfläche zu regulieren. Beispiele hierfür sind die Rezeptorabscheidung, bei der
Rezeptoren vorübergehend in das Zellinnere gebracht werden oder der Rezeptor-Abbau,
bei dem die Rezeptoren nach Internalisierung in Lysosomen abgebaut werden (Alberts
et al., 2011).
Dies könnte auch für die Frizzled-Rezeptoren ein wichtiger Regulationsmechanismus
sein. Daher sind für die Zukunft weiterführende Untersuchungen auf Protein-Ebene
interessant, um die eventuelle Beteiligung der Frizzled-Rezeptoren an der Pathogenese
des Mammakarzinoms besser verstehen zu können.
5.2 Semi quantitative Analyse der WNT-Expression mittels RT-
PCR in Mammakarzinomen
Nachdem im ersten Schritt die Expression der Frizzled-Gene, als Rezeptoren des
WNT-Signalweges im Brustkrebs genauer untersucht wurde, wurde im zweiten Schritt
eine systematische Analyse der WNT-Liganden-Expression auf mRNA-Ebene
durchgeführt. Obwohl schon seit 20 Jahren bekannt ist, dass eine Überexpression von
WNT1 bei der Maus zu einer malignen Entartung der Brust führen kann, gibt es bisher
in der Literatur noch keine umfassende, systematische Expressions-Analyse aller WNT-
Liganden im Mammakarzinom. Bislang wurden immer nur einzelne Moleküle mit
unterschiedlichen Methoden auf kleinen Kollektiven untersucht.
Es gelang zunächst für 17 der 19 bisher entdeckten WNT-Gene ein Primerpaar zu
generieren und für die RT-PCR zu etablieren. Dafür wurden Gewebeproben ausgewählt,
in denen die einzelnen WNTs laut Literatur stark exprimiert sind (Nusse, The WNT
Homepage, http://www.stanford.edu/group/nusselab/cgi-bin/wnt). Nur die erhaltenen
Primerpaare für WNT8b und WNT10b ließen sich trotz mehrfacher neuer Primersuche
aufgrund technischer Probleme nicht etablieren.
Im Rahmen der Untersuchung der WNT-mRNA-Expression im normalen Brustgewebe
ließen sich in der kommerziell erhältlichen Brustgewebe-cDNA der Firma Clontech bis
auf WNT16 alle untersuchten WNTs auf mRNA-Ebene nachweisen. Besonders starke
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