Promotion Wiebke Winkens Abgabeversion 2 - RWTH

Ergebnisse
-1000 -200
-199 600
601
Select lower limits: %GC=55 ObsCpG/ExpCpG=0,65 Length=500 Distance=100
CpG Island 1: Start -635, End=+80 %GC=55%, ObsCpG/ExpCpG=0,664, Length=716
= Transkriptionsstart 1. Exon
Abbildung 4-11: Schematische Darstellung der Promoterregion von WNT2b mit der CpG-Insel
(blau dargestellt), in Schwarz der Bereich, der mittels MSP untersucht wurde
Das erhaltene Primerset für den WNT2b-Promoterbereich wurde in der MSP
(methylierungs-spezifischen PCR) etabliert.
Im Folgenden wurde die Methylierung der WNT2b-Promoterregion an drei
Ovarialkarzinomzelllinien HEY; OV-4 und SKOV-3 mittels MSP nach Bisulfit-
Konversion genomischer DNA untersucht. In getrennten Reaktionen (U = Verwendung
von Primern für unmethylierte DNA, M = Verwendung von Primern für methylierte
MSP
DNA) wurde der Methylierungszustand qualitativ bestimmt.
Dargestellt in Abbildung 4-12 sind die Ergebnisse der methylierungs-spezifischen PCR.
Hierbei zeigte sich, dass bei allen drei untersuchten Zelllinien methylierte WNT2b
Allele vorliegen, erkennbar an den Banden in der Reaktion mit den Primern spezifisch
für methylierte DNA (M). Bei der Zelllinie HEY war nur methylierte DNA im
untersuchten Promoterfragment nachweisbar, während OV-4 und SKOV-3 methylierte
sowie unmethylierte DNA im untersuchten Promoterfragment zeigten.
U-
Kontrolle
M-
Kontrolle
NK
H20
U M U M U M
Abbildung 4-12: WNT2b-Promoter Methylierungsanalyse von verschiedenen
Ovarialkarzinomzelllinien
In einem weiteren Versuch wurde die Promotermethylierung von WNT2b in einem
Ovarkollektiv aus sechs Normalgeweben und acht Tumorgeweben mittels MSP nach
46