Auswirkungen skrotaler Hyperthermie auf quantitative und ...

Literaturübersicht
Nach PENA (2007) ist der Durchflusszytometrie im Vergleich zur mikroskopischen
Bestimmung der Spermienmotilität der Vorzug zu geben, da eine subjektive
Beeinflussung der Ergebnisse durch den Untersucher ausgeschlossen ist. Die
Durchflusszytometrie ist ein sensitives und objektives Verfahren und ermöglicht die
Analyse vieler lebender Zellen in kurzer Zeit (PENA et al. 1998). Die gegenüber der
Auswertung am Mikrosokop erhöhte Sensitivität resultiert aus der Analyse von 10000
Zellen. Aus diesem Grund ist auch die Erfassung geringer Abweichungen mit hoher
Wiederholbarkeit und Genauigkeit möglich (PENA et al. 2001). Außerdem erlaubt die
Durchflusszytometrie die gleichzeitige Messung multipler Samenqualitätsparameter
(BALLACHEY et al. 1986; PENA et al. 1998; GRAHAM 2001). Das Prinzip der
Methode besteht in der Markierung von Spermien mit einem fluoreszierenden
Farbstoff. Diese werden in einem Flüssigkeitsstrom an einem fokussierten Laser
vorbeigeführt. Ein optisches System detektiert die Lichtemissionen der einzelnen
Zellen und wandelt sie in digitale Signale um. Anschließend erfolgt die Auswertung
der Daten über einen an das Durchflusszytometer angeschlossenen Computer
(BALLACHEY et al. 1986).
2.7.2.1 Integrität von Plasma- und Akrosommembran
Da die Spermienmembran einen exakten Biosensor für den gesamten Zellstatus
darstellt, ist die Erfassung subtiler Veränderungen von großer Bedeutung (PENA
2007). Die Integrität der Plasmamembran sowie die Akrosomintegrität sind für die
Befruchtungsfähigkeit der Spermatozoen essentiell (PENA et al. 1998).
Das Lektin Peanut Agglutinin (PNA) bindet selektiv an der Innenseite der äußeren
Akrosommembran (FLESCH et al. 1998). Der an das PNA gekoppelte
Fluoreszenzfarbstoff Fluoreszein-Isothiocyanat (FITC) emittiert nach Laseranregung
Licht im grünen Bereich. FITC-PNA gefärbte Spermien mit geschädigtem Akrosom
können so anhand ihrer Grünfärbung durchflusszytometrisch ermittelt werden. Da
Lektine intrazellulär an akrosomgebundenes Material binden (CROSS u. MEIZEL
1989), können lediglich permeable bzw. geschädigte Akrosome gefärbt werden
(THOMAS et al. 1997), während sich intakte Akrosome nicht anfärben lassen
30