Auswirkungen skrotaler Hyperthermie auf quantitative und ...

Material und Methoden
3.5.1 Spermienkonzentration und Spermiengesamtzahl
Die Spermienkonzentration wurde mittels einer Thoma-Zählkammer bestimmt.
Zunächst wurden aus 10 ml einer 10 % NaCl-Lösung 20 – 100 μl entfernt, bevor
dieselbe Menge aus der spermienreichen Phase hineinpipettiert wurde. Der
Volumenanteil leitet sich aus der Konsistenz der Ejakulatfraktion (rahmähnlich,
rahmähnlich bis milchig, milchig, milchig bis molkig, molkig, molkig bis wässrig,
wässrig) ab. Für die Dichtebestimmung wurden ca. 8 μl der Spermiensuspension in
eine Zählkammer nach Thoma „neu“ pipettiert. Bei 200-facher Vergrößerung wurden
die Spermienköpfe in der unteren und oberen Zählkammer in jeweils fünf großen
Quadraten mit einem Phasenkontrastmikroskop ohne Heiztisch gezählt und addiert.
Die Spermienköpfe, die sich auf zwei der vier Begrenzungslinien eines Quadrates
befanden wurden ebenfalls mitgezählt. Zur Berechnung der Dichte (x 10 6 / ml) diente
folgende Formel: Summe ausgezählter Spermien / ausgezählte Fläche x
Kammerhöhe x Verdünnungsgrad. Die Spermienzahl (x 10 6 ) konnte anschließend
durch Multiplikation von Volumen und Dichte errechnet werden. Der gesamte
Vorgang wurde für jede Phase, in der sich Spermien befanden, durchgeführt. Die
Spermienzahlen aus allen Ejakulatfraktionen wurden addiert, um die
Spermiengesamtzahl im Ejakulat zu erhalten.
3.5.2 Subjektiv geschätzte Spermienmotilität
Um den Anteil (%) vorwärts-, orts- und unbeweglicher Spermien schätzen zu können,
wurden drei senfkorngroße Tropfen aus der spermienreichen Phase auf einen
Objektträger pipettiert und jeder mit einem Deckgläschen (18 x 18 mm) abgedeckt.
Alle verwendeten Materialien (Pipettenspitzen, Objektträger, Deckgläser) wurden auf
einem Heiztisch auf 38°C vorgewärmt, ebenso wie der Heiztisch des zur Schätzung
verwendeten Phasenkontrastmikroskops. Bei 160-facher Vergrößerung erfolgte die
Beurteilung der Bewegungsaktivität in mehreren zentralen Gesichtsfeldern jedes
Tropfens. Zusätzlich wurde festgehalten, ob sich in dem Ejakulat Beimengungen
38