Il Grifone in Italia WORKSHOP IL GRIFONE IN ITALIA - Acalandrostour

Il Grifone in Italia
controllato (captive breeding), con rilascio di individui idonei (wild-born, captive-born)
in habitat naturale, per l’incremento delle residue popolazioni autoctone (restocking) e la
reintroduzione negli areali storici, nell’ambito di specifici Piani di Azione (PdA) (IUCN,
1998; Gariboldi et al., 2004; Butchart et al., 2005, Andreotti & Leonardi, 2009). I programmi
di conservazione integrata sono interventi che richiedono la sinergia di numerose competenze
tecnico-scientifiche e tempi di realizzazione piuttosto lunghi anche per il tasso di fertilità delle
specie prioritarie frequentemente basso, come, ad esempio, per gli Avvoltoi. La possibilità di
nuove biotecnologie per aumentare il tasso di fertilità ha portato, nell’ultimo ventennio, allo
sviluppo di studi specie-specifici sulla biologia riproduttiva dell’avifauna selvatica protetta
e nell’ambito di questi programmi di ricerca, sono state definite metodiche di riproduzione
assistita, sia a livello diagnostico che terapeutico, efficaci ed applicabili in campo.
Obiettivi e Metodi
Per la conservazione delle specie minacciate, la definizione del sesso è determinante per
lo studio della sex ratio delle popolazioni naturali (conservazione in situ) e per la precoce
scelta dei riproduttori nell’ambito dei programmi di riproduzione in ambiente controllato
(conservazione ex situ). In alternativa alla determinazione del sesso basata sulla valutazione,
non sempre attendibile, di elementi morfologici e comportamentali ed alle tecniche
chirurgiche, non prive di rischi per la salute dei volatili e di non pratica realizzazione in
pulli ancora presenti nel nido o in specie di piccola taglia, sono stati sviluppati specifici
protocolli di ricerca per la definizione di metodiche non invasive, da DNA estratto da piuma,
di sessaggio genetico degli uccelli monomorfici e dimorfici immaturi, efficaci e di agile
applicazione nella pratica clinica corrente.
La metodica di base che prevede l’estrazione e l’amplificazione del DNA dal calamo di 2-3
piume (regione pettorale), mediante l’impiego di una PCR (Polymerase Chain Reaction)
con primers universali per il gene CHD-1 (Chromobox Helicase DNA binding domain) dei
cromosomi sessuali, è stata applicata in centinaia di specie dell’avifauna protetta autoctona
ed alloctona di numerosi ordini, come Falconiformi, Accipitriformi, Strigiformi, Galliformi,
Passeriformi e Psittaciformi. La conservazione dei campioni di piume è stata realizzata per
mesi, ed in alcune specie come l’Aquila reale (Aquila chrysaetos), anche per anni, a temperatura
ambiente. L’estrazione del DNA viene effettuata over night mediante una digestione tissutale
propedeutica a 55°C in medium di lisi con proteinasi K (kit GenEluteTM Mammalian
Genomic DNA miniprep - Sigma, Milano). Le condizioni di reazione standardizzate per
l’amplificazione del DNA, mediante l’ausilio di una coppia di primers P2e P8 in un mix di
buffer, nucleotidi e Taq polimerasi (Eppendorf, Milano), sono usualmente di 94°C per 120 s
e 35 cicli a 94°C per 45 s (denaturazione), 48°C per 45 s (annealing) e 72°C per 45 s, con un
ciclo finale a 72°C per 5 min (estensione) utilizzando il termociclatore Mastercycler Personal