Pseudomonas syringae DC3000 levaansukraasi Lsc3 katalüütilise ...
Pseudomonas syringae DC3000 levaansukraasi Lsc3 katalüütilise ...
Pseudomonas syringae DC3000 levaansukraasi Lsc3 katalüütilise ...
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
1. 2. 3. 4. 5. 6. 1. 2. 3. 4. 5. 6.<br />
7. 8. 9. 10. 7. 8. 9. 10.<br />
Joonis 5. Natiivsed polüakrüülamiidgeelid mutantsete <strong>levaansukraasi</strong>de aktiivsuse<br />
hindamiseks E. coli rakulüsaatides. Paneelidel A ja C on 10% sahharoosi lahuses ilmutatud ja<br />
paneelidel B ja D valgule värvitud geelid. Rajad: 1. pURI3 (tühi vektor); 2. <strong>Lsc3</strong> D62A; 3.<br />
<strong>Lsc3</strong> D219A; 4. <strong>Lsc3</strong> D219N; 5. <strong>Lsc3</strong> E303A; 6. ja 10. puhastatud muteerimata <strong>Lsc3</strong> valk; 7.<br />
<strong>Lsc3</strong> P222L; 8. <strong>Lsc3</strong> D225A; 9. <strong>Lsc3</strong> D225N.<br />
Geelipiltidelt on näha, et <strong>Lsc3</strong> mutandid Asp62Ala, Asp219Ala ning Glu303Ala ei tooda<br />
sahharoosiga ilmutatud geelil levaani (Joonis 5A), kuid paralleelselt tehtud ning valgule<br />
värvitud teine natiivne geel näitas, et mutantsete <strong>levaansukraasi</strong>de ekspressioon oli olemas<br />
(Joonis 5B). Mutandil Asp219Asn ekspressioon puudus nagu nägime eelnevalt ka<br />
denatureeriva geeli analüüsil (Joonis 4). Mutantide Pro222Leu, Asp225Ala ning Asp225Asn<br />
rakuekstraktid sisaldasid suurel hulgal katalüütiliselt aktiivset <strong>levaansukraasi</strong> valku, mis oli<br />
võimeline sahharoosist levaani tootma (Joonis 5C, D).<br />
Järgmisena määrati rekombinantsetest rakulüsaatidest <strong>levaansukraasi</strong> koguaktiivsus, mõõtes<br />
100 mM sahharoosist moodustuvat glükoosi hulka (pt. 2.2.5). Saadud tulemused on<br />
koondatud Tabelisse 3.<br />
27
Change language