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4.2.6 Der Effekt von 2-APB und Capsazepine auf Spermatogonien Ergebnisse In allen untersuchten Kulturen konnten Ströme abgeleitet werden, die aufgrund ihrer individuellen Strom-Spannungs-Kennlinien nicht eindeutig als „klassische“ spannungsaktivierte Ionenkanäle identifizieren werden konnten. Da die gemessenen Kennlinien (s. Abb. 4.28 A-D, Kontrollspur (links)) Ähnlichkeiten mit TRP-Kanälen aufwiesen, wurden die Blocker 2-APB und Capsazepine getestet. Der Antagonist 2-APB blockt in der TRPC Familie TRPC1-6, sowie in der TRPM Familie TRPM2-3 und TRPM8. Der Antagonist Capsazepine hingegen blockt in der TRPM Familie TRPM8, sowie in der TRPV Familie TRPV1 (siehe www.clapham.tch.harvard.edu). Für die Versuche wurde 2- APB in einer Konzentration von 50 µM eingesetzt und Capsazepine in einer Konzentration von 20 µM. Spannungsrampen von -100 mV bis +100 mV zeigten, das sich in 51 % aller gemessenen Zellen Ströme durch 2-APB blockieren ließen (n = 34/67) (s. Abb. 4.28 A). Des Weiteren konnte in 26 % aller gemessenen Zellen (n = 16/61) ein Effekt von Capsazepine beobachtet werden (s. Abb. 4.28 B). In Experimenten, bei denen die Wirkung beider Antagonisten in denselben Spermatogonien untersucht wurde, zeigte, dass eine individuelle Zelle entweder nur durch 2-APB (s. Abb. 4.28 D, n = 8) oder nur durch Capsazepine inhibiert wurde (s. Abb. 4.28 C, n = 2). Keine der getesteten Zellen ließ sich durch beide Antagonisten beeinflussen. Zur weiteren Untersuchung wurde mit Ruthenium Rot ein dritter, vergleichsweise unspezifischer Antagonist getestet. Ruthenium Rot inhibiert TRPC3, TRPM6 und TRPV1-6 (www.clapham.tch.harvard.edu). Keine der getesteten Zellen wurde durch Ruthenium Rot inhibiert. 97
Ergebnisse Abb. 4.28: Der Effekt von 2-APB und Capsazepine auf Spermatogonien. A) Blockierung der Ströme durch 50 µM 2-APB. B) Blockierung der Ströme durch 20 µM Capsazepine. C) Blockierung der Ströme durch 20 µM Capsazepine, aber nicht durch 50 µM 2-APB. D) Blockierung der Ströme durch 50 µM 2-APB, aber nicht durch 20 µM Capsazepine. 98
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Identifikation und funktionale Char
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Inhaltsverzeichnis 1. Einleitung 1
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4.2 Elektrophysiologische Charakter
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Einleitung der die Duftmoleküle l
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Einleitung Abb.1.2: Modell der Seku
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Einleitung Die Frage, ob jedes Sper
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Einleitung Abb. 1.3: Schematische D
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Einleitung besitzt vier Ca 2+ -Bind
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Abb. 1.4: Spermienentwicklung. Darg
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1.8 Exkurs: Der weibliche Zyklus Ei
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Einleitung In Spermien ist der Kana
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Einleitung Kv3.4, Kv4.1, Kv4.2 und
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1.10 Exkurs-TRP-Kanäle Einleitung
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Einleitung - Die TRPML Familie - Di
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Einleitung Ein wichtiges Ziel diese
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Trypsin/EDTA Gibco BRL Tween-20 Sol
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Material & Methoden Pipetten Pipetm
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Lyse-Puffer 10 mM Tris-HCl; pH 7,9
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Material & Methoden 10 ng/ml EGF (S
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Standard TEA Extra 130 mM NaCl pH =
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2.5 Bakterienstämme Material & Met
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2.8 Verwendete Duftstoffe Bourgeona
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14610 22083 22650 23827 24576 24801
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3. Methoden - Zellkultur - Furaneol
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Material & Methoden Der 1 ml Transf
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