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Ergebnisse
Um die Existenz eines T-Typ Stromes weiter zu bestätigen, wurde Mibefradil verwendet, eine
Substanz, die vorzugsweise Ca 2+ -Kanäle vom T-Typ inhibiert (CaV 3.1, CaV 3.2, CaV 3.3
(Martin et al., 2000)). Die chemische Struktur von Mibefradil, ein Tetralol-Derivat,
unterscheidet sich von anderen Ca 2+ -Antagonisten. Nach Etablierung der whole-cell
Konfiguration und Aktivierung T-Typ-artiger Ca 2+ v-Ströme durch das beschriebene
hyperpolarisierende Vorpuls-Protokoll, konnte durch die Applikation von 10 µM Mibefradil
eine vollständige Inhibition des T-Typ-artigen Kanals erreicht werden (Abb. 4.22 A). Durch
die Subtraktion der Ströme unter Mibefradilbedingungen von denen unter
Kontrollbedingungen, kann der inhibierte Stromanteil des T-Typ Stroms isoliert werden (s.
Abb. 4.22 A, rechts). Bei der Quantifizierung der Stromamplitude konnte gezeigt werden,
dass die zugrunde liegende Kanalaktivierungsschwelle bei ca. -50 mV liegt (s. Abb. 4.22 B).
In Abbildung 4.22 C und D ist die spannungsabhängige Inaktivierungskinetik als
Zeitkonstante Tau eines monoexponentiellen Fits der Gesamtströme (Kontrollbedingungen)
und der isolierten T-Typ Ströme (Kontrollbedingung – Mibefradilbedingungen) aufgetragen.
Abb. 4.22: Mibefradil blockiert T-Typ Kanäle in Spermatogonien. A) Ströme eines Spermatogoniums im
ersten Vorpuls-Protokoll vor und nach Applikation mit 10 µM Mibefradil, sowie der geblockte Anteil des T-Typ
Stroms ermittelt durch Differenzbildung. B) Aktivierungsschwelle des T-Typ Kanals. C) Inaktivierungskinetik
der Gesamtströme. Die Inaktivierungskinetik ist spannungsabhängig. D) Inaktivierungskinetik der isolierten T-
Typströme. Die Inaktivierungskinetik ist spannungsabhängig.
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