Identifikation und funktionale Charakterisierung - Logo Dragon-Ivf ...

Diskussion
bewirkten. Dieser Befund war anhand der Untersuchungen mit Conotoxin MVIIC nicht zu
erwarten (s. Abschnitt 4.2.4, Abb. 4.25). Trotzdem spricht sehr viel für einen N-Typ Kanal, da
N-Typ Kanäle in reifen Mäusespermien exprimiert werden (Wennemuth et al., 2000) und sich
diese Kanäle reversibel durch ω Conotoxin MVIIC inhibieren lassen (Liu et al., 1996), was
auch in dieser Arbeit gezeigt werden konnte. Dass in der vorliegenden Arbeit keine Inhibition
durch ω Conotoxin GVIA beobachtet wurde, liegt eventuell an der verwendeten
Blockerkonzentration von 1 µM. In einigen Arbeiten wurde eine Konzentration von 3-5 µM
verwendet (Wennemuth et al., 2000; D’Ascenzo et al., 2004). Daher müssen weitere
Experimente mit erhöhten Inhibitorkonzentrationen in Zukunft durchgeführt werden, um das
pharmakologische Profil des nicht molekular identifizierten HVA-Kanals eindeutig
herauszuarbeiten.
Ein weiterer Kanalkandidat ist der R-Typ Kanal. Dieser Kanal wird ebenfalls in
Mäusespermien exprimiert (Wennemuth et al., 2000). Dabei ist bekannt, dass R-Typ Kanäle
nicht durch die genannten Toxine geblockt werden. Gegen einen R-Typ-Kanal spricht aber,
dass sich der hier identifizierte Kanal durch ω Conotoxin MVIIC inhibieren lässt, während in
der Literatur beschriebene R-Typ Kanäle nicht durch diesen Antagonisten inhibiert werden.
Ein weiterer Grund für die nicht eindeutige Identifikation dieses Kanaltyps könnte bsp. auch
die Expression einer bislang unbekannten Splice-Variante oder der Einfluss verschiedener
β-Untereinheiten sein. Außerdem müssen in erneuten Experimenten (Positivkontrollen) die
benutzten Antagonisten noch mal auf ihre Funktionalität überprüft werden. Die ebenfalls noch
ausstehende RT-PCR-basierte Identifikation spezifischer HVA-Kanal-Transkripte in RNA
Extraktionen aus Spermatogonienkulturen wird weiteren Aufschluss über die molekulare
Identität des hier charakterisierten Kanaltyps geben.
Wie schon in den Ergebnissen beschrieben, kamen beide Typen von Ca 2+ V-Kanälen in der
Regel erst ab Tag 7 in Kultur vor. Diese Ergebnisse passen zu den Untersuchungen von
Hagiwara und Kawa. Diese konnten zeigen, dass die Anzahl der Ca 2+ V-Ströme während der
Spermatogenese zunimmt, während die Anzahl der Kaliumkanäle abnimmt (Hagiwara und
Kawa, 1984). Eine Hypothese ist, dass die Reduzierung der Kaliumströme hilfreich für die
Aktivierung der Ca 2+ -Ströme ist, da die Zellen bei reduzierter Kaliumkanal-Expression
leichter depolarisieren können (Hagiwara und Kawa, 1984). Ob die Anzahl der Kaliumkanäle
hier ebenfalls abnimmt, ist nicht eindeutig festzustellen, da bei allen Ca 2+ -Kanal
Untersuchungen extrazelluläre Lösungen verwendet wurden, deren ionale und
pharmakologische Zusammensetzung Kaliumkanäle blockiert.
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