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Ergebnisse
(s. Abb. 4.15 A6 = Tag 6). Die an verschiedenen Tagen in Kultur aufgenommenen
Fluoreszenzbilder (Abb. 4.15 A1-A4) zeigen deutlich, dass sich die Spermatogonien in Kultur
weiter ausdifferenzieren. Um sicherzustellen, dass während die nachfolgend beschriebenen
elektrophysiologischen Ableitungen tatsächlich an Spermatogonien und nicht an Sertolizellen
oder anderen testikulären Zelltypen durchgeführt wurden, wurden die untersuchten Zellen
während der Patch-clamp Messungen im whole-cell Modus mit dem in der Pipettenlösung
enthaltenen Fluoreszenzfarbstoff AlexaFluor® 488 Hydrazid markiert (s. Abb. 4.15 B).
Dadurch konnten untersuchte Zellen nach den Experimenten (post-hoc) in der Kultur
gefunden und Antikörperfärbungen durchgeführt werden. Die Abbildungen 4.15 B1-B3
zeigen ein nach einer Patch-clamp Messung mit Alexa Hydrazid markiertes Spermatogonium
(B1). Die post-hoc Färbung derselben Zelle gegen DAZL (B2) ist in der Überlagerung (B3)
zu erkennen. Die DAZL-Färbung ist allerdings nicht mehr eindeutig membranständig, da es
mit Abzug der Patchpipette nach Beendigung der Messung zu einer Degeneration der
Zellstruktur kommt. Durch routinemäßige post-hoc Antikörperfärbungen (n = 18 Zellen, 7
Kulturen) konnten die Spermatogonien eindeutig identifiziert und somit gezeigt werden, dass
die erhobenen Daten die elektrophysiologischen Eigenschaften kultivierter Spermatogonien
widerspiegeln.
Abb. 4.15: Identifizierung von Spermatogonien durch immunzytochemische Färbungen mit DAZL. A)
Spermatogonien an verschiedenen Tagen in Kultur (A1 = Tag 2; A2 = Tag 3; A3 = Tag 4; A4 = Tag 6; A5 = Tag
6, DAPI Färbung; A6 = Tag 6, Kontrolle, ohne 1. Antikörper). B) Doppelfärbung mit Alexa Hydrazid und
DAZL.
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