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Ergebnisse
Für die Versuche wurden HEK293-Zellen 2 Tage vor der Messung mit dem OR1D2 Plasmid
transfiziert und nach Applikation verschiedener Duftstoffe auf Änderungen der intrazellulären
Ca 2+ -Konzentration untersucht. Die getesteten Duftstoffe sind nicht namentlich aufgeführt,
sondern besitzen Zahlenkodierungen, da sie noch nicht patentiert sind. Bei der Identifizierung
aktivierender Liganden muss beachtet werden, dass in dem genutzten HEK-Zell-System nur
einmal eine Duftrezeptor-induzierte Veränderung der Ca 2+ -Konzentration gemessen werden
kann, danach reagieren die Zellen nicht mehr (Spehr et al., 2003, Abb. 4.1 C).
Um die Änderungen der intrazellulären Ca 2+ -Konzentration zu detektieren, wurde das
bildgebende Ca 2+ -Imaging Verfahren genutzt. Mit dem Ca 2+ -Imaging Verfahren können
Messungen sowohl auf Einzelzell- als auch auf Populationsniveau durchgeführt werden.
Dabei werden in Echtzeit Veränderungen der zytosolischen Ca 2+ -Konzentration fluoreszenzratiometrisch
gemessen.
Abb. 4.1: Das rezeptive Feld von OR1D2 A) Messung der Ca 2+ Änderungen in mit OR1D2 tranzfizierten
HEK293-Zellen. Nur das Molekül 23872 induziert in diesem Test transiente Ca 2+ -Signale. In der untersten Reihe
sind die Änderungen der [Ca 2+ ]i in Falschfarben dargestellt. Neben der Abbildung ist die verwendete
Farbkodierung des Verhältnisses der Fluoreszenzintensitäten, welche der [Ca 2+ ]i entsprechen, dargestellt. B)
24576 induziert transiente Ca 2+ -Signale. C) 24801 induziert transiente Ca 2+ -Signale. Die Düfte wurden in einer
Konzentration von 500 µM appliziert. Die Pfeile zeigen den Applikationsbeginn, die Applikationsdauer betrug
10 s. D) Das rezeptive Feld von OR1D2 mit allen getesteten Duftstoffen.
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