Identifikation und funktionale Charakterisierung - Logo Dragon-Ivf ...

Ergebnisse
Abb. 4.24: Blockerexperimente des T-Typ Kanals in einem Strom-Rampenprotokoll. A) Einwaschen des
Blockers Mibefradil führt zu einem vollständigen Block des T-Typ Kanals, der teilweise reversibel ist. B)
Einwaschen des Blockers ω Conotoxin MVIIC führt zu keinem Block des T-Typ Kanals.
Wie bereits in Abbildung 4.21 A erkennbar, exprimieren Spermatogonien auch Ca 2+ -Kanäle,
die erst durch positivere Membranspannungen aktiviert werden. Um diese Kanäle zu isolieren
wurde auf einen Vorpuls von -30 mV, gefolgt von weiteren Depolarisationsschritten,
geklemmt (s. Abb. 4.25 A). Die Quantifizierung der induzierten Ströme ergab, dass die
Aktivierungsschwelle bei ca. -20 mV lag (s. Abb. 4.25 B). In Abbildung 4.25 C ist die
Inaktivierungskinetik dieses Stromes aufgetragen. Es lässt sich keine Spannungsabhängigkeit
erkennen. Auch hier wurden zur weiteren Identifizierung und Charakterisierung des Kanals
pharmakologische Tests durchgeführt. Da der abgeleitete Strom den Kriterien eines L-Typ
Kanals entspricht, wurde zuerst Nimodipine, ein L-Typ Blocker, getestet. Die Versuche mit
diesem Blocker zeigten allerdings keine Strominhibition (n = 4). Daher wurden nun
spezifische Blocker für N-, P-, Q- und R-Typ Kanäle getestet. Nach Einwaschen von 750 nM
ω Conotoxin MVIIC konnte eine reversible antagonistische Wirkung beobachtet werden (s.
Abb. 4.25 D, Mitte). Des Weiteren wurde Agatoxin IVa getestet. Dieser Blocker hatte
allerdings, wie in Abbildung 4.25 E zu sehen ist, keinen Effekt.
Das Diagramm in Abbildung 4.25 F zeigt alle getesteten Blocker in einer Übersicht. Nur ω
Conotoxin MVIIC (n = 7) inhibiert mit einer normierten Restamplitude von 29 % diesen
Kanal. Werden die extrazellulären Kationen durch NMDG ersetzt, bleibt nur eine
Restamplitude von 26 % übrig (n = 3). Die Antwortamplitude unter Nimodipine lag bei 85,8
% (n = 4), unter ω Conotoxin GVIA bei 96,7 % (n = 4) und unter Agatoxin IVa bei 96 % (n =
6).
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