Impact des mÃ©taux lourds sur les interactions plante/ver de terre ...

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Partie B : Matériel et MéthodesIV/ ANALYSES PHYSIQUES ET CHIMIQUESIV.1 Propriétés physiques et chimiquesLes analyses physiques et chimiques ont été réalisées au Laboratoire d’analyse del’Université d’Agronomie et de Foresterie d’Ho Chi Minh Ville, Vietnam. Les mesures et lesméthodes utilisées (modifiées avec conditions standards au laboratoire, TCVN) sontregroupées dans le Tableau 4 ci-dessous:Paramètre mesuréMéthodetel-00486649, version 1 - 26 May 2010pH eau -Matière organique (g.kg -1 )Méthode ChiurinCapacité d’échange cationique (CEC) (cMol.kg-1)Azote organique (g.kg-1)Méthode IRRI.ASLMéthode KjedhalAzote disponibilité (N 2 O 5 ) (g.kg -1 )Méthode KjedhalPhosphore total et disponibilité (P 2 O 5 ) (g.kg -1 ) SpectrocolorimétriePotassium total et échangeable (K 2 O) (g.kg -1 )Spectrométrie de flammeTableau 4 : Les paramètres physico-chimiques mesurésIV.2 Teneur en plomb des plantesLes feuilles, les tiges et les racines des plantes sont pesées puis séchées à l’étuve, lateneur en plomb étant estimée par g de poids sec. La teneur en plomb a été déterminée aulaboratoire d’analyses chimiques de l’Université d’Agronomie et de Foresterie d’Ho ChiMinh ville à l’aide d’un spectromètre d’absorption atomique (Spectro AA220) (Figure 26).Figure 26 : Spectromètre d’absorption atomique38
Partie B : Matériel et MéthodesV/ TECHNIQUES MICROBIOLOGIQUESV.1 DOSAGES ENZYMATIQUESV.1.1 Préparation des solutions de soltel-00486649, version 1 - 26 May 2010Afin de « réveiller » la microflore tellurique du sol, quatre grammes d’échantillon de solsont ajoutés à 600 µl d’eau distillée et sont ensuite placés en incubation pendant 48h dans uneétuve à 25°C (Tabatabai et al., 1994). Pour obtenir des solutions de sol à 1 g.ml -1 , on ajoute,après incubation, 4 ml d’eau distillée dans les flacons, qui sont ensuite placés sous agitationmagnétique à température ambiante.Dans le cadre de cette étude, neuf activités enzymatiques ont été recherchées. Pourchaque dosage, 3 essais, 2 témoins enzyme, 1 témoin réactif et 1 témoin substrat sont réalisés.V.1.2 Dosage des phosphatases (acide et alcaline)Les activités phosphatases ont été effectuées selon la technique de Nannipieri et al.(1995). Deux classes de phosphatases peuvent être distinguées selon leur pH optimumd’activité : les phosphatases alcaline et acide. Les activités phosphatases ont donc étémesurées à deux pH différents : pH 4 pour les acides et pH 9 pour les alcalines. Le milieuréactionnel est composé de 0,1 ml de solution enzymatique, 0,1 ml de substrat et 0,4 ml dutampon Mac Ilvain à pH 4 et tampon Borate à pH 9. Les conditions de réaction standard sont :incubation sous agitation à 37°C pendant 15 min (pour les acides) et 60 min (pour lesalcalines), la réaction est arrêtée par l’addition de 100μl de CaCl 2 0,5N et 400μl de NaOH 1N.Les tubes contenant le mélange sont ensuite centrifugés à 12000 g pendant 5 min. La lectures’effectue au spectrophotomètre (Genesys 5, BIOlOCK) à une longueur d’ondes de 450 nm etl’activité enzymatique est exprimée en µg de phénol libéré par g de sol sec et par heure.V.1.3 Dosage des polysaccharidases :La mesure de l’activité enzymatique est basée sur le dosage des sucres réducteursproduits par l’hydrolyse du substrat (amylase, xylanase et carboxyméthylcellulase) par unetechnique colorimétrique modifiée par Deng et Tabatabai (1994) et Badiane et al. (2001).Pour mesurer les activités polysaccharidases, 0,3 ml de solution de sol sont mélangés à 0,1 ml39
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RéférencesJiménez, J.J., Cepeda,
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RéférencesKuperman, R.G., Carreir
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