Terapia prechirurgica della fibromatosi uterina - FedOA - Università ...

quanto riguarda la valutazione vascolare, è stata effettuata una
immunocolorazione per il CD34, marker pan-endoteliale, utilizzando un
anticorpo primario anti-CD34 (QBEnd 10 monoclonale di topo, 1:200; Dako).
Le sezioni sono state incubate per una notte a 4°C, in camera umida.
Dopo l’incubazione ed il lavaggio, le sezioni sono state incubate con
anticorpi legati a biotina e streptavidina marcata con perossidasi (LSAB-HRP,
Dako, Italia). Come soluzione di substrato cromogeno è stata utilizzata la 3,3
diaminobenzidina (DAB, Laboratori Vector, Burlingame, CA) con lo 0.3% di
H2O2. Dopo la colorazione nucleare con ematossilina, le sezioni sono state
montate con mezzo sintetico (Entellan, Merck, Dermstad, Germania).
L’espressione di PCNA è stata valutata osservando la colorazione
nucleare delle fibrocellule muscolari lisce dei leiomiomi. Soltanto le cellule
con evidente colorazione sono state ritenute positive. L’espressione di PCNA
è stata quindi definite utilizzando uno score semi-quantitativo: + (< 5% di
cellule colorate), ++ (5-10% di cellule colorate), +++ (>10% di cellule
colorate).
L’espressione di CD34 è stata valutata come colorazione citoplasmatica
delle cellule endoteliali vascolari ed indicata come positiva o negativa. Il
numero di vasi positivi per CD34, includendo anche i vasi mono-endotelizzati,
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