Applied Biosystems StepOne™ System Real-Time PCR System ...

Capitolo 2 Disegno dell'esperimento
Impostazione del metodo di esecuzione
Impostazione del metodo di esecuzione
Nella schermata Run Method (Metodo di esecuzione), rivedere il volume di reazione e il
metodo di esecuzione predefinito. Se necessario, modificare il volume di reazione e il
metodo di esecuzione oppure sostituirli caricando un metodo di esecuzione dalla libreria.
Informazioni sul
disegno di
esempio
L'esperimento di esempio esegue reazioni da 25-µl utilizzando il metodo del saggio di
genotipizzazione del metabolismo di farmaci TaqMan ® indicato qui di seguito. Poiché il
Sistema StepOne viene utilizzato per l'esecuzione del ciclo termico, il metodo di
esecuzione contiene una fase ciclica per la PCR.
Lettura
pre-PCR
Ciclo termico
Lettura
post-PCR
Fase/Passaggio
Fase di
attesa
Fase di
attesa
Denaturazio
ne
Cicli (50 cicli)
Annealing/
Estensione
Fase di
attesa
Temperatura 60 °C 95 °C 92 °C 60 °C 60 °C
Tempo
(hh:mm:ss)
00:00:30 00:10:00 00:00:15 00:01:00 00:00:30
Acquisizione dati Sì No No Sì Sì
Nota: Nel metodo di cui sopra, l'acquisizione dei dati viene attivata per la fase di
annealing/estensione consentendo al Sistema StepOne l'acquisizione dei dati in tempo
reale durante la PCR. Sebbene i dati in tempo reale siano non necessari per la
genotipizzazione, i dati sono utili in caso di mancata riuscita della risoluzione problemi
PCR.
Rivisualizzazione
della schermata
Run Method
(Metodo di
esecuzione)
1. Fare clic sul campo Reaction Volume Per Well (Volume di reazione per
pozzetto), quindi immettere 25.
2. Fare clic sul campo Number of Cycles (Numero di cicli) della fase ciclica, quindi
immettere 50.
3. Fare clic sull'impostazione della temperatura del primo passaggio della fase ciclica
(95 °C/00:20), quindi immettere 10:00.
4. Regolare il primo passaggio della fase ciclica:
a. Fare clic sull'impostazione della temperatura del primo passaggio (95 °C),
quindi immettere 92 °C.
b. Fare clic sull'impostazione della temperatura del primo passaggio (92 °C),
quindi immettere 00:15.
5. Fare clic sull'impostazione della temperatura del secondo passaggio (60 °C) della
fase ciclica, quindi immettere 01:30.
Note
24
Guida introduttiva al sistema Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System per gli esperimenti di
genotipizzazione
RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.