Applied Biosystems StepOne™ System Real-Time PCR System ...
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Capitolo 3 Preparazione delle reazioni<br />
Preparazione della miscela di reazione<br />
Preparazione della miscela di reazione<br />
Preparare la miscela di reazione per l'esperimento utilizzando i volumi calcolati dal<br />
software StepOne . Il software StepOne determina quali componenti della miscela di<br />
reazione utilizzare sulla base delle selezioni effettuate nella schermata Methods and<br />
Materials (Metodi e Materiali) (vedere “Rivisualizzazione dell'impostazione della<br />
reazione” a pagina 26). Per gli esperimenti di genotipizzazione, la miscela di reazione<br />
contiene tutti i componenti eccetto il campione, il buffer o il controllo positivo.<br />
Materiali<br />
necessari<br />
Preparazione<br />
della miscela di<br />
reazione<br />
• Master Mix TaqMan ® Universal <strong>PCR</strong> veloce (2 ® ), No AmpErase✕ UNG<br />
• Saggio di genotipizzazione del metabolismo di farmaciTaqMan ® (20✕)<br />
• Acqua priva di DNAse<br />
• Provette per microcentrifuga<br />
• Pipettatori<br />
• Puntali per pipette<br />
• Centrifuga<br />
PERICOLO CHIMICO. La Master Mix TaqMan ® 2✕ Universal<br />
<strong>PCR</strong>, No AmpErase UNG può provocare irritazione degli occhi e della pelle.<br />
L'esposizione può provocare problemi in caso di ingestione o inalazione. Leggere la<br />
scheda di sicurezza dei materiali (MSDS) e attenersi rigorosamente alle istruzioni<br />
relative alla manipolazione di questa sostanza. Indossare un'adeguata protezione oculare,<br />
indumenti e guanti di protezione.<br />
1. Per il saggio SNP, aggiungere i volumi richiesti di ogni componente in una provetta<br />
dalle dimensioni appropriate:<br />
Volume di reazione<br />
Componente<br />
Per pozzetto(µl)<br />
24 Rxns. incluso<br />
10% in eccesso (µl)<br />
Secco Umido Secco Umido<br />
TaqMan ® Universal <strong>PCR</strong> Master Mix (2✕) 12.50 12.50 330 330<br />
SNP Assay Mix (20✕) 1.25 1.25 33 33<br />
H 2 O, priva di DNase 11.25 0 297 0<br />
Volume totale della miscela di reazione 25.00 13.75 660 363<br />
2. Pipettare la miscela di reazione con cautela su e giù, quindi tappare la provetta.<br />
3. Centrifugare brevemente la provetta.<br />
Note<br />
36<br />
Guida introduttiva al sistema <strong>Applied</strong> <strong>Biosystems</strong> StepOne <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> <strong>PCR</strong> <strong>System</strong> per gli esperimenti di<br />
genotipizzazione<br />
RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.
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