Applied Biosystems StepOne™ System Real-Time PCR System ...

Capitolo 2 Disegno dell'esperimento
Rivisualizzazione dell'impostazione della reazione
Rivisualizzazione dell'impostazione della reazione
Nella schermata Reaction Setup (Impostazione reazione), immettere il volume di
reazione e il numero di reazioni in eccesso da preparare, quindi rivedere le impostazioni
di concentrazione per la Master Mix PCR, per l'Assay Mix, il target campione diluito e
gli stock di campioni ed effettuare le modifiche necessarie.
Informazioni sul
disegno di
esempio
L'esperimento di esempio richiede una miscela di reazione sufficiente per 24 reazioni e
un volume del 10 per cento per errori di pipettaggio. Ogni reazione da 25-µl consiste in:
Componente
µl/Pozzetto
2✕ TaqMan ® Universal PCR Master Mix, No AmpErase ® UNG 12.50
20✕ TaqMan ® Drug Metabolism Genotyping Assay 1.25
Genomic DNA template (3 to 20 ng) + DNAse-free water 11.25
Volume totale 25.00
Completamento
della schermata
Reaction Setup
(Imposta
reazione)
1. Fare clic sul campo Reaction Volume Per Well (Volume di reazione per
pozzetto), quindi immettere 25 µl.
2. Fare clic sul campo Excess Reaction Volume (Volume di reazione in eccesso),
immettere 10%.
3. Verificare che la concentrazione della Master Mix sia 2✕.
4. Verificare che la concentrazione dell'Assay Mix TaqMan ® sia 20✕.
1
2
3
4
5. Selezionare la scheda Sample Dilution Calculations (Calcoli diluizione del
campione).
Note
26
Guida introduttiva al sistema Applied Biosystems StepOne Real-Time PCR System per gli esperimenti di
genotipizzazione
RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.