Applied Biosystems StepOne™ System Real-Time PCR System ...
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Capitolo 3 Preparazione delle reazioni<br />
Preparazione delle diluizioni del campione<br />
Preparazione delle diluizioni del campione<br />
Diluire lo stock del campione alle concentrazioni operative utilizzando i volumi calcolati<br />
dal software StepOne (vedere “Rivisualizzazione dell'impostazione della reazione” a<br />
pagina 26).<br />
Informazioni<br />
sull'esperimento<br />
di esempio<br />
I volumi calcolati per l'esperimento di esempio di genotipizzazione sono elencati qui di<br />
seguito. La concentrazione finale è 30.0 ng/µl.<br />
Provetta<br />
Nome<br />
campione<br />
Concentrazione<br />
stock campione<br />
(ng/µl)<br />
Stock<br />
campione<br />
(µl)<br />
Volume (µl)<br />
Acqua priva<br />
di DNAse<br />
(µl)<br />
Totale<br />
campione<br />
diluito (µl)<br />
1 Campione 1 100.0 0.66 1.54 2.20<br />
2 Campione 2 100.0 0.66 1.54 2.20<br />
… … … … … …<br />
21 Campione 21 100.0 0.66 1.54 2.20<br />
Materiali<br />
necessari<br />
Preparazione dei<br />
campioni<br />
• Acqua priva di DNAse per la diluizione del campione<br />
• Provette per microcentrifuga<br />
• Pipettatori e puntali per pipette<br />
• Stock campione<br />
• Vortexer<br />
• Centrifuga<br />
1. Etichettare una provetta per microcentrifuga separata per ogni campione:<br />
Campione 1, Campione 2,… fino al Campione 20.<br />
2. Aggiungere 1.54 µl di acqua priva di DNAse a ogni provetta vuota.<br />
3. Aggiungere 0.66 µl dello stock campione appropriato a ogni provetta.<br />
4. Agitare su Vortex ogni campione diluito da 3 a 5 secondi, quindi centrifugare<br />
brevemente le provette.<br />
Linee guida per la<br />
preparazione<br />
Per ulteriori<br />
informazioni<br />
Per preparare i campioni per il proprio esperimento:<br />
• Utilizzare acqua priva di DNAse per la diluizione dei campioni.<br />
• Utilizzare la stessa quantità di DNA per pozzetto per ogni esperimento.<br />
• Non riscaldare i campioni di DNA.<br />
Per ulteriori informazioni sulla preparazione dei saggi di genotipizzazione SNP<br />
TaqMan ® , fare riferimento al protocollo appropriato per i reagenti utilizzati nelle reazioni<br />
<strong>PCR</strong> (vedere “Per ulteriori informazioni” a pagina 34).<br />
Note<br />
Guida introduttiva al sistema <strong>Applied</strong> <strong>Biosystems</strong> StepOne <strong>Real</strong>-<strong>Time</strong> <strong>PCR</strong> <strong>System</strong> per gli esperimenti di<br />
genotipizzazione<br />
RISERVATO - Esclusivamente per uso interno AB. Non distribuire.<br />
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